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液相色譜柱的再生方法，升級版本
客戶提問：
我手頭使用的色譜柱出現(xiàn)檢測異常,，已經(jīng)按照說明書進(jìn)行日常和再生沖洗,，但是色譜柱的檢測性能不能恢復(fù)，請問還有其他的方法嗎,？
色譜柱作為色譜分析中金貴的耗材,，面對柱子污染的情況,，我們總是想通過清洗與再生的方式讓其恢復(fù)性能,。月旭科技的技術(shù)人員建議各位老師按照說明書進(jìn)行沖洗操作，但總有老師想要有更多讓色譜柱*的方法,。
今天,，小旭就給各位老師帶來液相色譜柱再生方法的升級版本，請各位注意哈,，雖說本文并非zhao謠傳謠,，但也非guan方方法，請各位老師斟酌后再采用,。
硅膠基質(zhì)反相色譜柱的清洗與再生
1,、常規(guī)樣品污染色譜柱清洗與再生
被常規(guī)樣品污染的硅膠基質(zhì)反相色譜柱，已有各種清洗與再生方法,。月旭科技在對普通常規(guī)反相柱子的異常沖洗中,，一般建議客戶用甲醇-乙腈-異丙醇-乙腈各項沖洗20倍柱體積的方法進(jìn)行沖洗。
市面上也有些公司推薦使用一些更強(qiáng)溶劑的洗脫方式,。如用二氯甲烷：甲醇（96:4,，V/V），加1%氫氧化銨沖洗,，其中加入的氫氧化銨對聚集在柱頭的污染物具有良好的清洗效果,。再如,，在用水沖洗色譜柱同時進(jìn)4等份的200μL二氯甲砜，然后依次用甲醇,、氯仿和甲醇沖洗,。用N，N-二甲基甲酰胺,、丙酮依次沖洗色譜柱,。這些方法耗時短，但使用的特殊溶劑,，如氫氧化銨,、二氯甲砜、N,，N-二甲基甲酰胺等,，均對色譜固定相有一定的損傷。
2,、金屬離子污染色譜柱的清洗
當(dāng)色譜柱被金屬離子污染后,，一般的清洗方法無法生效，需要用特殊的清洗方法,。磷酸和0.1mol/L檸檬酸對色譜柱上吸附的金屬離子具有較好的清洗效果,，因此常被人們用來清洗被金屬離子污染的色譜柱[1]乙二胺四乙酸（EDTA）能同許多金屬離子形成配合物，0.05mol/L的EDTA水溶液也可以用來去除色譜柱中金屬離子污染物,。
這些試劑雖然能去除金屬污染物,，但也存在一些缺陷，如水溶液對固定相的浸潤性較差,，清洗效果不太理想,；磷酸對固定相上鍵合相有一定的破壞作用；EDTA帶入鈉離子,，對固定相性能產(chǎn)生影響,。
3、蛋白質(zhì)污染色譜柱的清洗
蛋白質(zhì)分子量大,，同時具有親水和疏水特性,，對很多物理和化學(xué)因素敏感。一般情況下,，純有機(jī)溶劑如乙腈或甲醇不能很好溶解多肽和蛋白質(zhì),，不能有效地清洗色譜柱，因而需要一些特殊的清洗方法,。
現(xiàn)常用方法是用不含緩沖鹽的流動相-0.1%TFA（三氟yi酸）水溶液-乙腈：異丙醇（1:2,，V/V，含0.1%TFA）各項沖洗20倍柱體積，或用0.1%TFA（三氟yi酸）：乙腈（1:1,，V/V）用0.2mL/min流速,，過夜沖洗色譜柱。
當(dāng)上述方法無效時,，可使用一些苛刻的試劑,，如鹽酸胍、二甲基甲酰胺及表面活性劑等,。如用50%異丙醇水溶液沖洗時,，將6mol/L鹽酸胍水溶液與異丙醇按1:1混合，進(jìn)樣250μL,；或者用30%二甲基甲酰胺水溶液清洗,，時間不超過30min，處理后反復(fù)用水,、甲醇沖洗,。在常規(guī)流動相沖洗色譜柱時，注射500μL的1%十二烷基硫酸鈉（SDS）,，然后用5%~95%乙腈水（含0.1%TFA）梯度沖洗,，去除蛋白污染物效果也較好。[2]若已確定蛋白質(zhì)污染種類,，可將對應(yīng)蛋白水解酶（如1%胰蛋白酶或木瓜蛋白酶）注入色譜柱,，將蛋白質(zhì)水解為肽，再用鹽溶液洗脫,。
蛋白質(zhì)污染色譜柱,，不論是用高濃度的磷酸鹽溶液，還是用尿素或胍來清洗色譜柱,，對色譜柱都會產(chǎn)生較大損傷,，同時損害色譜儀器,。其中使用注射1%SDS法清洗色譜柱,，不僅節(jié)省時間，還能得到較好的效果,，是現(xiàn)有清洗方法中較優(yōu)的選擇,。
離子交換色譜柱的清洗與再生
離子交換色譜柱在ji端pH范圍和高鹽濃度條件下長時間使用，或者分析蛋白等生物類樣品后,，鹽離子及蛋白質(zhì)會吸附于固定相表面,，導(dǎo)致色譜柱分離能力下降，柱壓升高,，峰形變差,。
對于污染的離子交換色譜柱，月旭科技的Ultimate® XB-SCX和Ultimate® XB-SAX建議用不含有緩沖鹽的流動相-10%甲醇沖洗20倍柱體積,。
若常規(guī)的方法無法改善色譜柱性能的,，可根據(jù)色譜柱性質(zhì)及具體污染情況,，選擇強(qiáng)酸性或強(qiáng)堿性溶液、高鹽溶液,、含有機(jī)溶劑的緩沖溶液,、含尿素等溶劑或表面活性劑（非離子型表面活性劑）的緩沖鹽溶液、某些蛋白質(zhì)變性劑（如鹽酸胍和尿素等）以及蛋白酶中一種或幾種組合進(jìn)行清洗和再生,。
體積排阻色譜柱的清洗與再生
體積排阻色譜是基于分子尺寸大小將物質(zhì)分離的一種色譜模式,。
月旭Xtimate® SEC的柱子，日常的沖洗建議用10%乙腈或5%乙腈-90%乙腈沖洗20倍柱體積,。但當(dāng)多次使用后,，某些樣品可能會吸附到入口篩板或填料上。當(dāng)積累至一定程度時會出現(xiàn)壓力升高并伴隨峰形展寬的異?，F(xiàn)象,，需要進(jìn)行特殊的沖洗。該沖洗的清洗溶液選擇的基本原則：1）低pH的鹽溶液有助于移除堿性蛋白,；2）有機(jī)溶劑有助于移除疏水蛋白,；3）助溶劑有助于去除在固定相上強(qiáng)吸附的物質(zhì)（如通過氫鍵作用等）。
注意：只有在中性鹽溶液或有機(jī)溶劑沒有明顯改善效果的情況下,，使用助溶劑（如：6-8M的尿素或0.2-0.3%十二烷基硫酸鈉）,。
參考文獻(xiàn)
[1] 張玉奎，張維冰,，鄒漢法. 分析化學(xué)手冊[M].第6分冊.液相色譜分析,。北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000.
[2] Ralph A Grohs,，F(xiàn) Vincent Warren Jr, Brain A Bidlingmeyrer. Analysis of drugs in the presence of serum albumin by liquid chromatography with eluents containing surfactants [J]. Anal Chem, 1991, 63(4): 384-390.