Hello，大家好,，小編又和大家見面了,。在前期內(nèi)容中，大家已經(jīng)了解氣相色譜法,、SPE固相萃取技術在食品檢測領域中的應用,。那么，今天小編就帶大家了解另外一種分離分析技術——HPLC（高效液相色譜法）,。
HPLC
HPLC是20世紀60年代末開始發(fā)展起來的新型高效分離分析技術,，是以液體為流動相，可以解決沸點高,、難氣化,、熱穩(wěn)定性差、極性強的化合物分析,。但在使用過程中經(jīng)常會出現(xiàn)化合物保留時間重現(xiàn)性不好的現(xiàn)象,，一般有兩種情況，即保留時間波動和保留時間漂移,。前者是指保留時間沒有固定規(guī)律的變化,，而后者指保留時間沿著單方向發(fā)生改變,。保留時間波動往往與儀器檢測條件,、泵穩(wěn)定性密切相關，保留時間漂移一般是由色譜柱老化,、柱效變差所引起,。
今天，我們就詳細地了解一下,，影響保留時間漂移的因素有哪些,？以及該如何解決？
如若發(fā)生保留時間漂移,，首先需要考慮流動相是否已使色譜柱達到充分的平衡,。一般情況下，流動相平衡色譜柱需要10-20個柱體積,；但如果流動相中有使用弱酸,、弱堿、緩沖鹽和離子對試劑,，則需要更長的時間來平衡色譜柱,。還有可能是流動相受到污染（水是容易受到污染的流動相成分），存在于流動相中的小分子污染物會在色譜柱中慢慢富集,，從而也會造成保留時間的漂移,。
不同填料、不同鍵合相的色譜柱,，其固定相的穩(wěn)定性也有所區(qū)別,。如：普通硅膠填料色譜柱的耐受pH范圍為2-8,；聚合物基質(zhì)色譜柱耐受pH范圍在1-14；有機無機雜化硅膠填料的耐受pH范圍能達到1-12.5,。即使在推薦的pH范圍內(nèi)使用色譜柱,，隨著進樣次數(shù)的增加，使用時間的延長,，也會造成鍵合相的水解脫落,。水解速度與所使用的流動相類型和配體有關。相比于單官能團配體,，雙官能團配體和三官能團配體的鍵合相更加穩(wěn)定,；長鏈鍵合相比短鏈鍵合相要穩(wěn)定；烷基鍵合相比氰基鍵合相更加穩(wěn)定,。
色譜柱也是分析試驗中的耗材,，所以在使用過程中需要按照說明書進行相關維護。當保留時間漂移嚴重時,，很有可能是色譜柱壽命已到,，需要及時進行更換。
在分析試驗中,，液相色譜柱不但會吸附待測組分,，同時也會對流動相攜帶的其他物質(zhì)產(chǎn)生吸附。造成色譜柱污染的來源可能是：流動相試劑瓶,、流動相本身,、儀器連接管路、進樣器,、泵和密封墊,，以及樣品本身所攜帶的雜質(zhì)。樣品基質(zhì)中如果含有保留性很強的污染物,，就可能是待測組分保留時間產(chǎn)生漂移的根源,。如：環(huán)境水樣中的腐殖酸、血清中的蛋白和脂類化合物以及配藥中的賦形劑等,。這些樣品中的污染物會在色譜柱的前端進行富集,，導致保留時間漂移，同時也會伴有柱壓的升高,。
可以通過SPE,、QuEChERS等前處理方法對樣品進行凈化，去除樣品中的雜質(zhì)和污染物,。此外,，可以通過使用保護柱來避免污染物與分析柱的直接接觸，或者通過反沖色譜柱來除去污染物（月旭科技絕大多數(shù)色譜柱都可以進行反沖）。
流動相組成成分的變化也會引起保留時間的漂移,，如流動相中易揮發(fā)組分的流失,、變質(zhì)等。
于進行過封尾處理的反相色譜填料,，當使用接近100%的水為流動相時,，會發(fā)生分離突然喪失、待測組分保留減弱,，甚至不保留的現(xiàn)象,，此種情況就是疏水坍塌。原因是100%的水相不能浸潤反相色譜填料,，挽救的辦法是先用含大量有機相的流動相浸潤色譜柱,，再用分析流動相進行平衡。色譜柱長期儲存也會發(fā)生此種現(xiàn)象,。使用嵌有極性基團的反相柱（如Ultimate polar-RP）或者未進行封尾處理的色譜柱可以有效避免發(fā)生坍塌現(xiàn)象,。
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