色譜柱那么多,,維護方式快拿走!(二)
繼我們的色譜柱那么多,,維護方式快拿走?。ㄒ唬?/strong>發(fā)出之后深受大家的關(guān)注和歡迎,很多朋友詢問系列篇(二)什么時候更新呀,,今天就來滿足一下大家的期待,,跟隨小編往下看哦!
氰基柱
氰基柱也是一款正相,、反相模式下均可使用的色譜柱,。氰基柱在反相條件下的弱點是對中等極性溶劑十分敏感,如THF(si氫呋喃),、EtOH(乙醇)等,,因此:
1、使用過程中要避免這些中等極性溶劑,,也不可保存在這類溶劑中,;
2、氰基柱相切換使用下要充分過度,,然后把流動相和混標(biāo)全部新配,,避免溶劑的影響,按照100%甲醇--100%乙腈--100%異丙醇--100%乙腈,,各項沖洗40min以上(異丙醇粘度大,,壓力高,注意調(diào)整流速在合適的范圍內(nèi)),;
3,、流動相平衡足夠長的時間(必要時打底進樣),待基線穩(wěn)定了,,按照空進樣--空白溶劑--對照品--供試品的順序進樣,;
SCX/SAX
陽/陰離子交換(SCX/SAX)色譜柱要避免高比例有機相和高濃度鹽(>100mM),否則鍵合相易脫落,或鹽析堵塞柱子,,色譜柱也不建議存在高比例有機相中,;另外色譜柱存放時間過長也易造成鍵合相脫落(一般建議在4℃下保存在10%甲醇中,然后隔一天拿出來沖洗一下,,確保鍵合相處于活性的狀態(tài)),。
1、當(dāng)出現(xiàn)分離度下降,,保留時間漂移等問題時,,將柱子先用10%甲醇沖洗(1-2小時),將鹽和酸沖干凈后,,重新配新的流動相,,平衡色譜柱。充分平衡后按照進空針--空白溶劑--對照品--供試品的順序進樣,;
2、若10%甲醇水沖洗無效的話,,SCX色譜柱用100mmol/L的NaClO4溶液(調(diào)節(jié)pH 4.0)--10%甲醇水,,各項溶劑沖洗60min以上;
3,、若10%甲醇水沖洗無效的話,,SAX色譜柱用1M的硝酸銨--40%甲醇--100%異丙醇--水--10%甲醇水,各項溶劑沖洗60min以上,;
Sugar-H/Sugar-Ca
聚合物基質(zhì)的色譜柱都是以樹脂的膨脹形態(tài)緊密裝填的,,如果樣品經(jīng)過了很好的前處理,那么大部分問題都與柱床和填料有關(guān),。使用過程中應(yīng)注意控制柱溫和流速,,避免溫度和脈沖造成的柱床損壞,以及有機相大比例不宜超過5%(具體可參見月旭公眾號推文:還在頭大se譜柱的使用,?快收好這份干貨),。
Sugar-H:當(dāng)出現(xiàn)峰形異常,柱效下降,,分離度降低等問題時,,可用:
1、pH2.5的酸溶液低流速沖洗12小時,,酸可以用硫酸,、鹽酸、磷酸,、高氯酸(避免使用硝酸等強氧化酸),,pH都調(diào)至2.5。沖洗時注意溫度設(shè)置80℃或85℃,流速多為0.5mL/min,。配制酸溶液的水中盡量不要有其他陽離子的干擾,;
2、沖洗完后用流動相平衡,,然后按照進空針--空白溶劑--對照品--供試品的順序進樣,;
3、日常使用時注意柱頭端和柱尾端是否有溫差,,以及配制流動相的水中盡量不含其他陽離子(尤其注意Na?,、K?等一價離子);
Sugar-Ca:鈣型陽離子柱的問題多是使用過程中Ca²?流失所致,,因此需注意及時補充流失的Ca²?(一般在出現(xiàn)上述問題時,,或使用流動相5L之后,需要用Ca²?溶液重新活化):
1,、用0.5g/L EDTA Ca(CAS:23411-34-9)溶液低流速沖洗12小時,,沖洗時注意溫度設(shè)置80℃或85℃,流速多為0.5mL/min,。配制Ca²?溶液的水中盡量不要有其他金屬陽離子的干擾,;
2、沖洗完后用流動相平衡,,然后按照進空針--空白溶劑--對照品--供試品的順序進樣,;
3、日常使用時注意柱頭端和尾端是否有溫差,,以及配制流動相的水中盡量不要有其他金屬陽離子的干擾(尤其注意Na?,、Mg²?等堿金屬離子);
Zn粉還原柱
Zn粉還原柱不能碰水,,遇水后Zn粉會失活,,所以遇到問題時一般處理按照:
1、100%甲醇沖洗,,1.0流速反沖3小時以上,;
2、沖洗完后用流動相平衡,,然后按照進空針--空白溶劑--對照品--供試品的順序進樣,;
3、若沖出了白色的物質(zhì)則可能是填料已損壞,,需重新購買色譜柱,;