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肉制品胭脂紅著色劑的測定
1,、適用范圍
適用于肉制品中胭脂紅著色劑的測定。
2,、提取步驟
試劑的配置：
1）硫酸溶液：1+9體積比,；
2）鎢酸鈉溶液：C=100g/L,；
3）無水乙醇+氨水+水=7+2+1；
4）檸檬酸溶液：C=200g/L,；
4）pH=5的水,，取100mL的水，用檸檬酸溶液調(diào)節(jié)至pH值=5.
提取過程：
稱取試樣10 g,，均質(zhì)器均質(zhì)1min,，然后加入20 mL石油醚提取脂肪，超聲5 min,，靜止沉降2 min后棄去石油醚,，重復(fù)3次。吹干后加入10 mL提取液（無水乙醇+氨水+水=7+2+1）提取胭脂紅,，邊攪拌邊過濾（用30mL帶篩板的固相萃取空柱管進(jìn)行過濾）,，重復(fù)提取3-5次，收集全部的提取液,。70 oC水浴旋蒸至10mL以下,，加入1mL硫酸溶液和1mL鎢酸鈉溶液，繼續(xù)70o
注意：1）提取胭脂紅需多次提取,，確保提取*,；
2）提取胭脂紅的過程中不能用濾紙過濾，因?yàn)闉V紙會(huì)極大程度的吸附胭脂紅色素,；
3）本解決方案創(chuàng)新性的以SPE空柱管作為過濾提取后的肉制品的裝置,，相比其他的過濾裝置更為；
4）提取胭脂紅后所得的樣品溶液,，加入硫酸溶液和鎢酸鈉溶液沉淀蛋白后,，需要用純水洗滌蛋白殘?jiān)@樣可以有效的提取吸附在蛋白殘?jiān)械碾僦t,；
5）本實(shí)驗(yàn)的加標(biāo)回收率是將肉制品去除脂肪后,，再加入胭脂紅進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。
3,、聚酰胺SPE柱凈化步驟凈化：
SPE柱：Welchrom®PA（1g/6mL）
活化：6mL純水,；
上樣：將提取步驟處理好的樣品溶液過Welchrom®聚酰胺固相萃取柱，棄去上樣流出液,；
淋洗：6mL pH=5的水,，6mL甲醇+加酸（6+4），12mL純水洗至中性,；
洗脫：6mL無水乙醇+氨水+水(7+2+1),，收集洗脫液。
濃縮：將收集的洗脫液旋蒸至近干,，加水定容至10ml,，過水膜上機(jī)測定。
標(biāo)樣配置：1 mg./ml胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液,，取50 µl并用水定容至10 mL
注：濃縮后的溶液應(yīng)用水系濾膜過濾,，不能用有機(jī)系濾膜，因?yàn)橛袡C(jī)系濾膜容易吸附胭脂紅,，從而損失回收率,。
4、色譜條件：
色譜柱：月旭Ultimtae®XB-C18,4.6×150,5µm,；
流動(dòng)相：甲醇：0.02 mM乙酸銨溶液,，梯度洗脫；
流速：1.0 mL/min,；
柱溫：30 ℃
檢測波長：254 nm,；
進(jìn)樣量：20 µL
表1：液相色譜梯度洗脫條件
| 時(shí)間/min | 甲醇/% | 0.02mM乙酸銨溶液/% |
| 0 | 22 | 78 |
| 5 | 35 | 65 |
| 20 | 85 | 15 |
| 21 | 22 | 78 |
| 25 | 22 | 78 |