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產(chǎn)品描述

蘇木素染色液綜合了多種經(jīng)典的方法配制而成,。該溶液無汞,，可用于免疫組化復(fù)染和H＆E染色。

訂購信息

運輸與保存

常溫運輸,。常溫避光保存,，有效期12個月。

使用方法

1.     試劑準備

酸酒精：在100mL 70%乙醇中加入1mL 鹽酸,，室溫保存,。注：冰凍切片后，各種步驟（干燥,，乙醇或甲醇固定,，熱固定，使用帶電的或有粘性的蓋片）保證組織切片在染色過程中不脫落,。

2.     95%乙醇：在HE染色開始前,，組織切片需要固定并水化。將切片置于95%乙醇中約2min,，開始水化并固定組織,。注：跳過使用95%乙醇對組織進行水化和固定,，并不影響形態(tài)學(xué)上的細節(jié)。

3.     水化：進一步對組織切片進行水化3-5min,，并沖掉前一步殘留的乙醇。

4.     蘇木素：水化后,，組織切片用蘇木素染色1-3min,，可根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整染色時間。蘇木素是一種基本染料,，可以對細胞的酸性成分進行染色,，包括核酸、粘多糖,、酸性糖蛋白,，將他們?nèi)境伤{色或藍紫色。注：沒有蘇木素,，伊紅會將組織染成亮粉紅色,；顯而易見的是缺乏細胞核。組織結(jié)構(gòu)很難區(qū)分,，細胞內(nèi)成分幾乎都不存在,，難以辨別。針對上述問題,，可以使用蘇木素進行復(fù)染,。

(1)  染色較弱是由于：自身溶解或者固定不好；過度脫鈣,；染色時間不足,；過度脫色（酸與醇的比例過高或者酸乙醇脫色時間過長）；蘇木素的作用較弱（蘇木素氧化過度（過老）或水稀釋過度）,；漂洗溶液的污染,；切片過薄,；乙醇的去除或者染色前水的漂洗不充分,。

(2)  染色過度是由于：組織切片干燥；蘇木素濃度過高,；染色時間過長,；載玻片粘合劑過多；脫色過弱或時間不足,；切片過厚,；熱暴露的時間過長。

5.     水洗：蘇木素染色后,，用水洗組織是非常重要的,。這一步以及隨后的水洗,，可將多余的染料，媒染劑等去除,。適當(dāng)?shù)钠纯梢匀コ砻娼饘俟鉂?，金屬光澤可阻止蘇木素的染色。注：跳過此步,，將產(chǎn)生不好的結(jié)果,，例如沉淀的形成，染液的稀釋,，表面金屬光澤的存在,。

6.     酸酒精：酸酒精分色劑3-5s。在蘇木素染色方法中,，組織切片有意過度染色,，酸酒精將去除多余的染料以及玻片上的背景染色。

注：若省略此步驟,，切片將呈暗紫色,，嗜酸性結(jié)構(gòu)（如膠原）不會顯現(xiàn)出明亮的粉紅色，導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)之間難以區(qū)分,，從而影響對切片的準確判斷,。另外，分色過度可能是由于：酸濃度過高,；脫色時間過長等,。分色不足是由于：酸濃度過低；脫色時間不足,；在切片上有多余的蛋白或者明膠等,。

7.     水洗：水洗30s，終止酸酒精反應(yīng),，進一步阻止酸酒精從組織切片上將大量蘇木素去除,。注：如果切片沒有經(jīng)過漂洗，酸酒精可以過度脫色,。如果不去除脫色劑,，酸酒精將持續(xù)從組織切片上去除蘇木素。

8.     自來水沖洗或用藍化液藍化：自來水沖洗3-5min,，可起到發(fā)藍處理,，將紫紅色的蘇木素轉(zhuǎn)變?yōu)樗{紫色。通常,，發(fā)藍試劑是pH依賴性的,，由堿性溶液構(gòu)成。因此,，如果自來水作為發(fā)藍試劑,，pH值的每天監(jiān)控是非常重要的,，因為自來水的pH值可能每天都會波動?；蛴盟{化液藍化,，30s-1min；流動的自來水沖洗5min,；注：跳過發(fā)藍試劑步驟,，將會導(dǎo)致蘇木素染液的顏色發(fā)生微妙的變化，難以區(qū)分,。代替深藍色，細胞核將呈現(xiàn)紫色,，有時甚至是紅色,。細胞核不可過度藍染。如果組織染色過藍,，一般是在組織切片上蘇木素過多所致,。

9.     水洗：為伊紅復(fù)染做準備，通過水洗30sec,，將多余的發(fā)藍試劑去除,。因為在堿性環(huán)境下，伊紅無法染色,，水洗去除發(fā)藍試劑將允許伊紅保持其酸性pH值,，使伊紅得以均勻復(fù)染。注：發(fā)藍試劑之后,，如果沒有水洗,，組織切片無法正確使用伊紅染色。因此,，酸性結(jié)構(gòu)將被染為蒼白色并且不均勻,，進而導(dǎo)致錯誤的判斷。

10.   伊紅：為了正確區(qū)分胞內(nèi)結(jié)構(gòu),，伊紅是出色的蘇木素復(fù)染劑,。伊紅復(fù)染30-60s，可根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整染色時間,。伊紅是酸性染料,，可染細胞質(zhì)，尤其是線粒體,、分泌顆粒和膠原,。它可以區(qū)分細胞內(nèi)不同的細胞器以及不同的結(jié)締組織。注：使用伊紅復(fù)染組織切片的失敗,，將導(dǎo)致組織切片的低分化,。

(1)  染色較弱是由于：組織切片過?。蝗旧珪r間不足,；隨后95%酒精分化過度,。

(2)  染色過度是由于：染液濃度較高（可能是由于過度蒸發(fā)）；組織切片過厚,；染色時間過長,；隨后95%酒精分化不足。

(3)  伊紅染色未分化（一種顏色）是由于：固定不*底,；過度染色（染色時間過長或染液濃度過高）,。

11.   95%乙醇：95%乙醇處理2s-1min，根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整,；伊紅分化將產(chǎn)生不同的粉色,。注：如果95%乙醇被稀釋（例如，從前一步染色中攜帶了伊紅）,，分化的效果較差,。

12.   100%乙醇：通過100%乙醇使組織切片脫色。100%乙醇處理1min,；再用新的100%乙醇處理1min,。注：這一步很難引起注意，若無95%乙醇,，難以區(qū)分酸性結(jié)構(gòu),，組織切片成為粉色。若無100%乙醇脫水,，組織切片不能脫水,，導(dǎo)致在蓋片下形成水珠。這些水珠可與下一步的二甲苯結(jié)合而形成白色混濁物,，這將影響組織切片的質(zhì)量,。

13.   二甲苯：二甲苯處理5min。在充分脫水后,，二甲苯可將組織切片上的酒精去除,。去除酒精后，在載玻片上加蓋玻片時,，二甲苯也可作為包埋劑確?？扇芙狻Ｓ捎谟袧撛诘亩拘?，二甲苯替代品,，例如檸檬烯、環(huán)烷烴也可使用,。替代品可提供相同的組織染色質(zhì)量,，并且他們使用更安全,，操作更簡單。注：當(dāng)跳過此步驟時,，不使用二甲苯透明,，酒精將會保存于組織切片上，導(dǎo)致伊紅從切片上流出,。

14.   封片：中性樹膠封片,，自然風(fēng)干或烤干，顯微鏡觀察,。

染色結(jié)果：細胞核染為藍色,；細胞質(zhì)染為紅色。

注意事項

1． 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域。

2． 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3． 試劑應(yīng)保存于陰涼,、干燥,、通風(fēng)良好的環(huán)境中。

4． 本產(chǎn)品可與伊紅染色液（貨號：AS11L031）配合使用,。

5． 第一次使用本產(chǎn)品時建議先取1-2個樣品做預(yù)實驗,。

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本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域,。