目錄:和元李記（上海）生物技術(shù)有限公司>>PCR&q-PCR>>RT-PCR>> AN33L718All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)
| 參考價(jià) | ￥280-￥880 |
參考價(jià)：￥280 ~ ￥880
20T 100T
| 20T | 280元 | 999件可售 |
| 100T | 880元 | 999件可售 |
更新時(shí)間：2024-09-13 13:55:27瀏覽次數(shù)：479評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 20T、100T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | AN33L718,、AN33L719 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品描述
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)是一款高效,、便捷且高質(zhì)量的單鏈 cDNA 合成試劑盒，包含熱穩(wěn)定的 M-MLV GIII 逆轉(zhuǎn)錄酶及其反應(yīng)緩沖液,、RNA 酶抑制劑、dNTPs,、Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物等所有逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需組分,，僅需添加 RNA 模板和水即可啟動(dòng)反應(yīng),，生成的 cDNA 主要用于后續(xù)的 qPCR 分析。
提取的RNA 樣本常存在基因組DNA（gDNA）污染,，可能導(dǎo)致gDNA 與 cDNA 在 qPCR 中同時(shí)擴(kuò)增，影響定量準(zhǔn)確性,。本試劑盒通過(guò) dsDNase 高效去除gDNA，特異性降解雙鏈 DNA或DNA-RNA 雜合鏈中的 DNA 鏈,，并在逆轉(zhuǎn)錄溫度下快速不可逆失活。與傳統(tǒng)使用的 DNase I對(duì)比,，無(wú)需額外 EDTA 處理,，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程，降低逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的抑制風(fēng)險(xiǎn),。
本試劑盒可在同一管中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和gDNA去除兩個(gè)反應(yīng)，操作簡(jiǎn)便,，可有效降低復(fù)雜加樣過(guò)程造成的樣品污染和 RNA 降解的風(fēng)險(xiǎn),。但若基因組污染嚴(yán)重程度，建議選擇采用去除gDNA 污染與逆轉(zhuǎn)錄分開(kāi)進(jìn)行的操作方法,。
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase) | AN33L718 | 20T |
All-in-One RT MasterMix (with dsDNase) | AN33L719 | 100T |
產(chǎn)品組分
組分 | AN33L718（20T） | AN33L719（100T） |
A. All-in-One RT MasterMix | 80 μL | 400 μL |
B. dsDNase | 20 μL | 2*50 μL |
C. 10× dsDNase Bu?er | 40 μL | 200 μL |
D. Nuclease-Free Water | 400 μL | 2*1 mL |
運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃保存,，有效期24個(gè)月。
使用方法
1. 針對(duì)基因組 DNA 含量低的 RNA 樣品（推薦方案）
① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：
試劑 | 使用量 |
模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
All-in-One RT MasterMix | 4 μl |
dsDNase | 1 μl |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
a . 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量 RNA 作為模板,。
② 37℃溫育 2 min，以去除gDNA 污染,；
③ 55℃溫育 15 min；
④ 反應(yīng)結(jié)束后,，85℃溫育 5 min 以終止反應(yīng)；
⑤ 迅速將獲得的 cDNA 置于冰上,，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),；或立即保存于 -20℃。
2. 針對(duì)基因組 DNA 含量高的 RNA 樣品
(1) 基因組 DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：
試劑 | 使用量 |
模板 RNAa | 50 ng~1 μg |
dsDNase | 1 μl |
10× dsDNase Bu?er | 1 μl |
Nuclease-Free Water | To 10 μl |
a. 推薦采用試劑盒提取的 RNA 作為模板,。
② 輕柔吸打混勻，瞬離,；
③ 37℃溫育 2 min，以去除基因組 DNA 污染,；
注：若 RNA 中基因組 DNA 污染嚴(yán)重，可適當(dāng)延長(zhǎng) 37℃溫育時(shí)間至 5 min,。
④ 65℃溫育 2 min，使 dsDNase 失活,， 冰上放置。
(2) 第一鏈 cDNA 合成
① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：
試劑 | 使用量（實(shí)驗(yàn)組） |
“實(shí)驗(yàn) (1)"反應(yīng)產(chǎn)物 | 10 μl |
All-in-One RT MasterMix | 4 μl |
Nuclease-Free Water | To 20 μl |
② 輕柔吸打混勻，瞬離,；
③ 50℃溫育 15 min；
注：若目標(biāo) RNA 不含 Poly(A) 結(jié)構(gòu)，可預(yù)先 25℃溫育 10 min,。
④ 反應(yīng)結(jié)束后， 85℃溫育 5 min,，以終止反應(yīng)；
⑤ 將獲得的 cDNA 溶液置于冰上,，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注：cDNA 溶液置于 -20℃儲(chǔ)存,，建議不超過(guò) 1 周,；置于 -80℃可長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
注意事項(xiàng)
1. 預(yù)混液中已包含 Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物,，適用于含有 Poly(A) 結(jié)構(gòu)的真核生物 mRNA，以及不含 Poly(A) 結(jié)構(gòu)的原核生物 RNA,、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不適用于 miRNA 等小RNA模板,。
2. 由于隨機(jī)引物會(huì)在RNA的任意位置啟動(dòng)逆轉(zhuǎn)錄,，因此不建議使用本產(chǎn)品進(jìn)行真核生物全長(zhǎng)cDNA的克隆。
3. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,，不得用于臨床診斷,、治療等領(lǐng)域,。
本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域,。
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