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目錄:和元李記(上海)生物技術(shù)有限公司>>蛋白與免疫>>蛋白制備>> AP01L034RIPA裂解液(弱)

RIPA裂解液(弱)
  • RIPA裂解液(弱)
參考價158
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

參考價:¥ 158

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • Life-iLab/李記生物 品牌
  • AP01L034 型號
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地
規(guī)格

100ml

屬性

供貨周期:現(xiàn)貨 規(guī)格:100ml 貨號:AP01L034 應(yīng)用領(lǐng)域:生物產(chǎn)業(yè)

>
規(guī)格
100ml158元999件可售

更新時間:2024-08-07 13:08:12瀏覽次數(shù):730評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100ml
貨號 AP01L034 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
RIPA裂解液(弱),,是一種經(jīng)典的動物組織/細(xì)胞快速裂解液,通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細(xì)胞的消化作用使組織細(xì)胞崩解釋放出蛋白質(zhì),對細(xì)胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用,。李記生物 RIPA 裂解液(弱) 不含 PMSF 組分;適用于 PAGE,、Western Blotting 和免疫沉淀(IP)的研究,。

產(chǎn)品描述
RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液,是一種經(jīng)典的動物組織/細(xì)胞快速裂解液,,通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細(xì)胞的消化作用使組織細(xì)胞崩解釋放出蛋白質(zhì),,對細(xì)胞膜,、胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用,。李記生物 RIPA 裂解液(弱) 不含 PMSF 組分,;適用于 PAGE、Western Blotting 和免疫沉淀(IP)的研究,。
訂購信息

產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格
RIPA 裂解液(弱)AP01L034100mL

運輸與保存
常溫運輸,。4℃保存,有效期 12 個月,。
配方表
25mM Tris•HCl, 150mM NaCl, 1% NP-40, 0.25% sodium deoxycholate,,pH 7.6
使用方法
貼壁細(xì)胞
1. 取適量裂解液,加入蛋白酶抑制劑混合物(100×,,不含 EDTA) (貨號:AP02L084) 或 PMSF(終濃度為
1 mM,,但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性)。
2. 去除細(xì)胞培養(yǎng)液,,用預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次,。按照 6 孔板每孔加入 150-200ul 的裂解液的比例均勻加
入裂解液,如果細(xì)胞密度過高可增加裂解液的量至 250-300 uL,?!咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會使細(xì)胞裂解不
充分,影響蛋白提取的質(zhì)量,。
3. 用槍吹打數(shù)下,,冰上放置 10 min,,期間每隔 2 min 用槍吹打數(shù)下,。
4. 轉(zhuǎn)移細(xì)胞裂解液于 1.5 mL EP 管中。
5. 12,000 g,,4℃ 離心 5min,。
6. 收集上清。
懸浮細(xì)胞
1. 取適量裂解液,,加入蛋白酶抑制劑混合物(100×,,不含 EDTA) (貨號:AP02L084) 或 PMSF(終濃度為
1 mM,但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性),。
2. 收集細(xì)胞 0.5~2×107于 1.5mL 離心管中,,1mL 預(yù)冷的 PBS 洗滌兩次,1,000xg 離心 3 min,,棄上清,,
重復(fù)三次。
3. 按照 6 孔板每孔加入 150-200uL 的裂解液的比例均勻加入裂解液,,如果細(xì)胞密度過高可增加裂解液的
量至 250-300uL,?!咀ⅰ浚毫呀庖哼^少會使細(xì)胞裂解不充分,影響蛋白提取的質(zhì)量,。
4. 用槍吹打數(shù)下并劇烈震蕩,,冰上放置 10 min,期間每隔 2 min 震蕩一次,。
5. 12,000 g,,4℃ 離心 5 min。
6. 收集上清,。
組織樣品
1. 把組織jian成細(xì)小的碎片,。
2. 取適量裂解液,加入蛋白酶抑制劑混合物(100×,,不含 EDTA) (貨號:AP02L084) 或 PMSF(終濃度為
1 mM,,但 PMSF 不足以抑制所有蛋白酶活性)。
3. 按照每 100mg 組織加入 1mL 裂解液的比例加入裂解液(如裂解不充分可適當(dāng)增加裂解液,,如果需要
增加蛋白濃度可適當(dāng)減少使用的裂解液體積),。
4. 用勻漿器勻漿,直至充分裂解(為防止蛋白降解請于冰上操作),。
5. 12,000 g,,4℃ 離心 5 min。
6. 收集上清,。
注意事項
1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域,。
2. 如需檢測磷酸化蛋白,,則需要額外添加磷酸酶抑制劑 II cocktail(50×)(貨號:AP03L025) 。
3. RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物,,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA
等的復(fù)合物,。在不檢測基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,,可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗;
如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,,隨后離心
取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,,例如 NF-kappaB,、p53 等時,通常不必進行超
聲處理,,就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子,。
4. RIPA 裂解液(弱)含有較高濃度的去垢劑,,不能用 Bradford 法測定蛋白。
5. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。
然后同樣離心取上清,,用于后續(xù)實驗,。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不必使用勻漿器,,缺點是不如使
用勻漿器那樣裂解得比較充分,。
6. 通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 μL 裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量
到 200 μL 或 250 μL,。

表 1: RIPA 裂解液的使用量

樣品來源培養(yǎng)容器收獲細(xì)胞數(shù)RIPA 用量可制備樣品數(shù)
細(xì)胞6 孔板2.5 x 10^6150-250 μL400~600
60 mm 培養(yǎng)板5.2 x 10^6300-500 μL200~300
90 mm 培養(yǎng)板12.2 x 10^6500-1000 μL100~200
25 cm2培養(yǎng)瓶5 x 10^6300-500 μL200~300
75 cm2培養(yǎng)瓶2 x 10^71000-2000 μL50~100
組織20 mg 組織塊2.5 x 10^6150-250 μL400~600

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本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域,。



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