小麥胚芽凝集素，AF647標記

產品描述

小麥胚芽凝集素,， AF647標記（下文簡稱“AF647 WAG"）,， 是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結合的凝集素，可能是明亮和綠色熒光中最亮的WGA綴合物,。它是目前研究多,、應用廣泛的一類凝集素。由于WGA與糖綴合物結合,，其衍生物和綴合物被廣泛用于標記細胞膜和纖維化瘢痕組織,，用于熒光成像和分析。WGA的糖結合特異性與β-1,4-GlcNAc-連接殘基的序列,，即幾丁質酶有關,。每個單體包含兩個相同的非相互作用的結合位點，它們與3或4β-1,4-GlcNAc單元互補,。在所檢測的單糖中,，只有GlcNAc與WGA結合。甘露聚糖不結合,，而GalNAc只能弱結合,。WGA與含有Galβ（1--4）GlcNAcβ（1--3）重復序列（即聚乳糖胺型聚糖）的大寡糖中的內部GlcNAc殘基具有高親和力結合。N-乙酰神經氨酸只參與與WGA的低親和力相互作用,。WGA顯示了復雜的糖類特異性模式,，可用于復雜碳水化合物的結構分析,。

技術資料

訂購信息

運輸與保存

藍冰運輸,。-20℃避光防潮保存,，有效期12個月。

適用儀器

使用方法

溶液配制

1.         AF647 WAG儲備溶液（200X）配制

將 500 µL ddH₂O 添加到粉末小瓶中,，制成 2 mg/mL 的儲備溶液,。【注】：重新配制的儲備溶液可在 4℃ 下短期儲存,，或在 -20℃ 下長期儲存,。

2.         AF647 WAG工作溶液（1X）配制

將 5 μL 200X WGA 儲備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中?！咀ⅰ浚翰煌毎档膬?yōu)化染色濃度可能不同,。活細胞的推薦起始濃度為 5-10 µg/mL,。

操作步驟

1.         活細胞染色

(1)       用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次,。

(2)       添加 100 µL AF647 WAG 工作溶液。

(3)       將細胞與AF647 WAG 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 min,。

(4)       用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次,。

(5)       使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。

2.         固定細胞染色

(1)       在PBS中使用4％的甲醛固定細胞,?！咀ⅰ浚簩τ诠潭毎と旧ㄗh在沒有透化步驟的情況下進行染色,。固定后透化步驟會導致細胞內區(qū)室染色，如高爾基體和內質網 (ER) 結構染色,。

(2)       添加 100 µL AF647 WAG 工作溶液,。

(3)       在室溫下用AF647 WAG 工作溶液孵育細胞 10-30 min。

(4)       用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次,。

(5)       使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞,。

圖示

圖 1. 使用AF647 WAG 以 5 µg/mL的濃度在活細胞（Hela細胞） 染色 30 min，然后用 Hoechst 33342（Cat# AC12L021）染色,。最后使用帶Cy5和DAPI 濾光片組的熒光顯微鏡成像,。

注意事項

1.     本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷,、治療等領域,。

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