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產(chǎn)品描述
　　NP40裂解液（帶抑制劑）是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液，主要成分為50 mM Tris(pH7.4),，150 mM NaCl,，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate,，sodium orthovanadate,，sodium fluoride，EDTA,，leupeptin等多種抑制,。對胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用,，有利于胞漿蛋白,、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取,。適用于常規(guī)的Western,、IP和co-IP等實(shí)驗(yàn)蛋白樣品的制備,。
訂購信息

產(chǎn)品組分

保存方法
　　裂解液4℃保存，其余-20℃保存,，保質(zhì)期一年,。
使用方法

對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下,，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1~2秒后,，細(xì)胞就會(huì)被裂解,。
對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液,，混勻,，充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀,。如果細(xì)胞量較多,，必需分裝成50~100萬細(xì)胞/管，然后再裂解,。具體NP-40裂解液的使用量參照表1,。

2. 對于組織樣品
(1) 把組織*切成細(xì)小的碎片,；
(2) 融解NP-40裂解液，混勻,。取適當(dāng)量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM,。
(3) 按照每20 mg組織加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液,。如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量,。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿,，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后,，10000~14000 rpm離心3~5 min,，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作,。
注意事項(xiàng)

然后同樣離心取上清,，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,，不必使用勻漿器,，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

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