產(chǎn)品描述

PikoGreen dsDNA quantitation reagent是一種極為靈敏的雙鏈DNA熒光染料,，僅與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光,，且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比，在存在ssDNA,、RNA和單體核苷酸的條件下,，可以選擇性地檢測低至25 pg/mL的dsDNA。與傳統(tǒng)DNA定量方法相比,，具有靈敏度高,，特異性強，耐受性好,，線性范圍寬及方便操作等優(yōu)點,，適用于cDNA文庫構(gòu)建、DNA亞克隆,、PCR產(chǎn)物等領(lǐng)域的DNA濃度的精確測定,。相比傳統(tǒng)的方法，Pikogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢：

1. 靈敏：數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感,，可節(jié)省樣品。

2. 特異性強：只結(jié)合dsDNA,，特異性強,，不受樣品常規(guī)污染影響。傳統(tǒng)紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA,，蛋白,，RNA等影響。

3. 耐受性好：耐受較高濃度的鹽,、尿素,、乙醇、氯仿,、去垢劑,、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴增產(chǎn)物而無需從反應(yīng)混合物中純化DNA,。

4. 線性范圍寬：PikoGreen dsDNA染料測定DNA濃度,，在100pg/ml-100ng/ml范圍內(nèi)呈良好線性；熒光計兼容,。

5. 容易使用：在樣品中加入染料,，等待5~6 min染色，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板,。與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀和可適用于各種DNA樣品分析,、PCR的分析、芯片樣品,、DNA損傷分析,、酶活性分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域,。

該分析在四個數(shù)量級范圍內(nèi)呈線性,，且?guī)缀鯚o序列依賴性，可以精確地測量多個來源的DNA,，包括基因組DNA,、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產(chǎn)物,。該方法因其穩(wěn)定性,、靈敏性，已經(jīng)錄入《中國藥典》,。
訂購信息

運輸與保存
藍(lán)冰運輸,。-20℃避光保存，有效期24個月,。
使用方法
1. PikoGreen工作液的配制
使用前將PikoGreen dsDNA定量試劑回溫至室溫,；PikoGreen以100 µL 200×的濃縮液形式保存于無水DMSO中的（共10管）。實驗當(dāng)天,，根據(jù)實驗需求用1×TE按1:200 的比例稀釋適量定量試劑濃縮液,。例如要準(zhǔn)備足夠的操作溶液以2 mL檢測體系測定20個樣品，可向19.9 mL 1×TE 中加入100 µL PikoGreen dsDNA 定量試劑,。工作液見光易降解,，盡量在配好后幾小時內(nèi)使用。
2. 配制標(biāo)準(zhǔn)品DNA溶液
（1）用1 X TE溶液溶解dsDNA制備1 μg/mL dsDNA ,。根據(jù)在1 cm 光程長度的比色杯中A260 nm時的吸光度確定DNA 濃度,；相應(yīng)于1 μg/mLdsDNA 溶液A260=0.02。標(biāo)準(zhǔn)液常用小牛胸腺DNA制備,，PikoGreen 試劑測定法在通常污染核酸*劑的幾種復(fù)合物存在的條件下仍能保持線性良好,，但是，為了得到有效的對照處理,，被用來做標(biāo)準(zhǔn)曲線的dsDNA 溶液要用和實驗樣品相同的方式來處理,，并且應(yīng)該包含相同的可能存在的污染物。
（2）制備從0.5 ng/mL 到500ng/mL（見表1）單重復(fù)8 個點的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液,，然后與等體積的PikoGreen 工作液混和,，放入1 x 1cm 比色杯中?；旌舷嗤w積的1 x TE 和PikoGreen 操作溶液作為空白對照,避光于室溫下放置2~5 min,。

表1: 用1 x 1cm 比色杯時DNA 標(biāo)準(zhǔn)濃度配制參考

（3） 當(dāng)用微量檢測皿適配器時，PikoGreen 測定也可在較低的測定體積（50 μL 到200 μL）內(nèi)完成,。產(chǎn)生從1 ng/mL 到100 ng/mL（見表2）的標(biāo)準(zhǔn)曲線,，配制一系列的標(biāo)準(zhǔn)DNA 溶液，然后與等體積的PikoGreen 工作液混和,，將至少50 μL 溶液轉(zhuǎn)移到微量檢測皿中,。確信不要在樣品中引入氣泡，輕輕地彈微量檢測皿的外部經(jīng)?？梢则?qū)散氣泡,。避光于室溫下放置2-5 min。

表2：用微量檢測皿DNA 標(biāo)準(zhǔn)濃配制參考

（4） 孵育后用合適的熒光計測量樣品熒光值,。Ex/Em=480 nm/520 nm,，為了減少光漂白，應(yīng)保持所有樣品的檢測時間一致,。用熒光值最大的樣品校正儀器,。
（5）用檢測數(shù)據(jù)與DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度做回歸分析，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
3. 樣品分析
（1）用1 x TE 稀釋待測DNA 樣品至需要的體積（1x1 cm 比色杯需1.0 mL,，微量檢測皿需25~100 μL）。對樣品高度稀釋可以確保任何污染物都被最大限度地沖淡,。然而,，也要避免取樣體積太小而無法精確吸取的情況。
（2）在每個樣品中加入等體積PikoGreen 工作液,，混合好,，將混合物移入合適的比色杯,，避光于室溫下放置2~5 min,。
（3）檢測、讀取熒光值,，換算樣品中dsDNA濃度,。可以對樣品進(jìn)行不同的稀釋處理重復(fù)測定以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
注意事項

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用,，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域,。

2. PikoGreen定量試劑含有DMSO,，PikoGreen 是結(jié)合dsDNA，操作時采取適當(dāng)防護(hù)，戴手套小心操作,。

3. 盡管常見污染物不會影響PikoGreen 檢測dsDNA濃度（見表3）,，但是當(dāng)樣品中dsDNA濃度太低，RNA, ssDNA濃度超過dsDNA 10倍以上時,，RNA, ssDNA等污染還是會對檢測結(jié)果產(chǎn)生較大干擾,，在此種情況下，RNA 酶可以消除RNA干擾, RNA 酶A,、酶T1 ,、核酸酶S1 結(jié)合能除去ssDNA干擾，從而保證樣品熒光值是由dsDNA 產(chǎn)生,。

表3：Pikogreen定量耐受的污染物列表

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