首頁 >> 公司動(dòng)態(tài) >> 《Cell》│EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（IF：66.850）
2022年7月22日,，上海科技大學(xué)生命學(xué)院池天課題組,，在線發(fā)表學(xué)術(shù)論文“Large-Scale Multiplexed Mosaic CRISPR Perturbation in the Whole Organism"（最新影響因子：66.850）,。
生命學(xué)院池天課題組2016級博士劉波（已畢業(yè)）、2018級博士生荊征宇,、2019級博士生張校銘,、2014級博士陳玉鑫（已畢業(yè)）、2015級博士毛少帥（已畢業(yè)）為本文共同第一作者,。
池天教授為通訊作者,。
上海科技大學(xué)為第一完成單位,。本工作得到孫建龍,、林照博、黃行許實(shí)驗(yàn)室的幫助,。
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文章簡介
本篇文章報(bào)道了一種嶄新的小鼠基因打靶技術(shù)iMAP（inducible Mosaic Animal for Perturbation）,，快速鑒定了90個(gè)基因在39種組織的基本功能，構(gòu)建了世界首張小鼠“擾動(dòng)圖譜",。
早在2001年,，國際人類基因組計(jì)劃就公布了人類基因組序列。但目前為止,，約兩萬個(gè)哺乳動(dòng)物蛋白編碼基因在500多種細(xì)胞中的功能仍鮮為人知,。要解碼這些基因的細(xì)胞特異性功能，必須將其分別在各種細(xì)胞中敲除（擾動(dòng)）再鑒定其細(xì)胞表型,，即描繪“擾動(dòng)圖譜",。但用傳統(tǒng)的基因打靶方法，無法快速有效地描繪擾動(dòng)圖譜,，成為功能基因組學(xué)領(lǐng)域久攻不下的瓶頸,。池天課題組的成果為突破上述瓶頸、系統(tǒng)性解碼全部基因在各種細(xì)胞中的功能,，邁出了關(guān)鍵一步,。
iMAP融合了Cre-loxP和CRISPR-Cas9技術(shù),，其核心組成部分是一個(gè)轉(zhuǎn)基因序列，它由U6啟動(dòng)子和下游一串gRNA表達(dá)單位構(gòu)成,。轉(zhuǎn)基因通常只表達(dá)第?個(gè)sgRNA,，而利用藥物（他莫昔芬）激活Cre，導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因重組,，可使其余的sgRNA也得以表達(dá),，但每個(gè)細(xì)胞只隨機(jī)表達(dá)其中?個(gè)。這些sgRNA可在Cas9的幫助下敲除相應(yīng)的靶基因,，從而將小鼠轉(zhuǎn)化為嵌合體,。利用這種嵌合體，可同時(shí)鑒定多個(gè)基因分別在多種細(xì)胞里的功能,，也可衍生出多種傳統(tǒng)的單基因敲除品系用于后續(xù)實(shí)驗(yàn),。
圖1. iMAP原理
研究團(tuán)隊(duì)首先構(gòu)建了一個(gè)iMAP品系，它攜帶61個(gè)gRNA 表達(dá)單位,，共靶向6個(gè)功能已知的標(biāo)志基因,。該品系證明了iMAP的魯棒性，包括展示轉(zhuǎn)基因起碼能穩(wěn)定傳13代,。隨后構(gòu)建的iMAP品系攜帶100個(gè)gRNA表達(dá)單位,，靶向90個(gè)功能不甚清晰的基因，以此構(gòu)建了一個(gè)微型擾動(dòng)圖譜,，揭示了這90個(gè)基因分別在39個(gè)組織/細(xì)胞中對細(xì)胞存活,、擴(kuò)增、分化的影響,。
圖2. 微型擾動(dòng)圖譜,。展示100個(gè)sgRNA分別在39個(gè)組織/細(xì)胞類型中的豐度
該研究過程中,，科研人員使用了李記生物自主研發(fā)的熱門產(chǎn)品：EZ Trans細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑（高效） 貨號:AC04L091 / AC04L092
注意：C4058L1090在20年元旦已更換貨號為：AC04L091,，質(zhì)量不變。品列表-1.jpg)
——以上圖片截自期刊
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