CFDA-SE可用于細(xì)胞示蹤,，也可用于細(xì)胞增殖檢測。經(jīng)CFDA-SE標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究,，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能,。CFDA-SE常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測，也可用于成纖維細(xì)胞,，自然殺傷細(xì)胞,，造血祖細(xì)胞等其他細(xì)胞的增殖檢測。
檢測原理
CFDA SE可以通過完好的細(xì)胞膜,，進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶催化分解成CFSE,。CFSE可以隨機(jī)地、不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的賴氨酸殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng),，并標(biāo)記這些蛋白,，CFDA-SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光。CFDA-SE標(biāo)記的分裂細(xì)胞每分裂一次,，子代細(xì)胞的熒光會(huì)減弱一半,，分裂一次的細(xì)胞熒光強(qiáng)度減半(1/2)，分離兩次的細(xì)胞熒光強(qiáng)度再減半(1/4),，以此類推,，熒光強(qiáng)度按照1/2，1/4,，1/8,，1/16的規(guī)律逐漸遞減。
使用方法
1,、保存液配制（5 mM）
按需配制,，如取DMSO 360 μL，溶解1 mg CFSE,，超音波溶解,，得到5 mM CFSE保存液,將其按40 μL體積分裝于避光的無菌凍存管中,，-20℃可保存2個(gè)月。
2,、工作液配制
取 5mM 的CFSE稀釋液1μL,，加入1mL10％FCS的PBS稀釋。
3,、染色
(1) 重懸細(xì)胞,。用有5％ FCS的PBS重懸細(xì)胞，細(xì)胞濃度一般為1x1x10^6/mL（體外實(shí)驗(yàn)）或1x1x10^7/mL（轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)）,。
(2) 染色,。1mL DFSE工作液與1mL細(xì)胞懸液混合后37℃孵育5~10 min。期間輕輕混勻2次,。
(3) 終止染色,。用完培養(yǎng)液洗滌3次并離心。一般在第2次洗滌后再孵育5 min后進(jìn)行第3次洗滌,。冰冷的含10% 新生牛血清,、RPMI-1640 medium（含L-谷氨酰胺）（貨號(hào)：AC01L064），輕輕混勻1 min（用手輕彈,，切忌吹打）,，1500 r/min 離心5 min。
(4) 流式細(xì)胞儀在FL1通道檢測,。
注意事項(xiàng)
? 所有試劑在使用前均需解凍,、混勻，混勻過程中盡量避免產(chǎn)生氣泡,；CFDA SE溶劑在較低溫度下會(huì)凝固,，請于20-25℃水浴片刻至全部融化后再使用。
? 試劑中含有熒光染料,，保存或進(jìn)行標(biāo)記時(shí)盡量避光操作,，以避免熒光淬滅問題。
? 不同細(xì)胞的內(nèi)酯酶活性不同,，因此染色效果具有差異性,。可根據(jù)細(xì)胞類型及培養(yǎng)條件摸索最佳工作濃度,。
? 若需要對細(xì)胞進(jìn)行固定,，請用醛類固定劑如3.7%多聚甲醛于室溫固定15 min；之后若還需要進(jìn)行其他如抗體標(biāo)記,，請用冰丙酮透化處理細(xì)胞10min,。
? 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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