原代細(xì)胞凍存液的制備和使用對于細(xì)胞的保存和復(fù)蘇具有重要意義,。以下是制備和使用原代細(xì)胞凍存液的步驟：
制備：
準(zhǔn)備所需試劑和器材，包括DMSO,、FBS,、培養(yǎng)基、離心管,、移液管,、細(xì)胞計(jì)數(shù)板、顯微鏡等,。
收集細(xì)胞樣品,，加入適量培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌。
棄去培養(yǎng)基,，加入適量DMSO和FBS混合液進(jìn)行細(xì)胞凍存液的制備,。
將細(xì)胞凍存液分裝到凍存管中，每個(gè)凍存管中加入1毫升細(xì)胞凍存液,，標(biāo)記好凍存管,。
將凍存管放入梯度凍存盒中，然后保存至-80℃過夜(如果沒有凍存盒,，可以先在4℃冰箱放置30 min,，然后轉(zhuǎn)移至-20℃放置1-2 h，最后轉(zhuǎn)移至-80℃過夜),，第二天取出放入液氮罐,，并記錄好位置信息。
使用：
準(zhǔn)備所需器材和試劑,，包括細(xì)胞凍存液,、離心管、移液管,、培養(yǎng)基等,。
從液氮罐中取出凍存管，迅速放入37℃水浴鍋中進(jìn)行復(fù)蘇,。
復(fù)蘇后,，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。
保存：
在復(fù)蘇后數(shù)小時(shí)內(nèi)將細(xì)胞傳代并培養(yǎng),，以便快速擴(kuò)增和存儲(chǔ),。
可以將細(xì)胞保存在常規(guī)培養(yǎng)箱中，但需要注意溫度和濕度的控制,。
可以使用細(xì)胞凍存盒將細(xì)胞保存于-80℃冰箱中,，以延長細(xì)胞的存活時(shí)間,。
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