科研人員還在為如何選擇核酸染料而煩惱嗎,？
帶您認識幾款優(yōu)秀的核酸染料
一、 李記GelRed,李記GelGreen——李記生物研發(fā)的兩款核酸染料,。
據(jù)不*統(tǒng)計,，有強烈致癌、致畸作用的EB染料仍以90%的優(yōu)勢占據(jù)核酸染料使用量多,，在眾多的EB替代染料中,，名氣最大的要數(shù)Life公司的SYBR系列、美國Biotium公司的GelRed,GelReen染料,，其他替代染料要么是EB,吖啶橙改名,，要么是國內(nèi)不成熟的仿品，安全性毫無保障,。Life公司的SYBR Green,SYBR Goad, SYBR Safe嚴格意義上來講,，不能稱作安全染料。Biotium公司的GelRed,，Gelgreen是一款真正意義上的安全染料,，染色效果也好，但價格奇高,，做一塊50ml的瓊脂糖凝膠,，染料成本接近8元！
2015年,，李記生物經(jīng)長期研發(fā),，開發(fā)成功國產(chǎn)GelRed,GelGreen染料,。這兩款產(chǎn)品全面優(yōu)于SYBR系列染料，在靈敏度,、熒光強度,、穩(wěn)定性等方面甚至優(yōu)于原創(chuàng)廠家Biotium公司產(chǎn)品（見圖1.），而價格僅為原廠2/3,。
圖1：I,、Hela細胞與SYBR Green,李記GelRed及李記GelGreen在室溫下孵育一小時，用Olympus熒光顯微鏡觀察并拍照,，與SYBR Green孵育的細胞顯示出綠色熒光,，表明染料已透過細胞膜進入細胞并與核酸結(jié)合。李記GelRed,，李記GelGreen未顯示熒光,，說明李記染料未能透過細胞膜進入細胞。 II,、SYBR Green,李記GelRed及李記GelGreen染料相同DNA濃度下染色效果,。
產(chǎn)品信息
二、HRM專用熒光染料 —— LyGreen
高分辨率熔解曲線(high-resolution melting,，HRM)是一種基于單核苷酸熔解溫度不同而形成不同形態(tài)熔解曲線的基因分析新技術(shù),，具有*的敏感性,，可以檢測出單個堿基的差異,，并且成本低,、通量高、速度快,、結(jié)果準確,、不受檢測位點的局限，實現(xiàn)了真正的閉管操作,。在突變掃描,、單核苷酸多態(tài)性分析、甲基化研究,、基因分型,、序列匹配等方面HRM分析技術(shù)發(fā)揮著重要作用。
HRM分析的一個必要條件是飽和染料,，勝任這一任務的染料僅有：LC Green,SYTO 9, LyGreen等幾個產(chǎn)品,。
LyGreen™飽和核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結(jié)合飽和熒光染料，是新一代用于HRM分析的熒光染料,，也可用于實時定量PCR（qPCR）,。該染料結(jié)構(gòu)上由兩個單體染料分子通過一個彈性臂連接成一個二聚體，在沒有dsDNA存在時，該結(jié)構(gòu)呈無熒光環(huán)狀結(jié)構(gòu),，一旦有dsDNA出現(xiàn),，則恢復隨機形態(tài)并與dsDNA結(jié)合發(fā)出強烈的綠色熒光。 與其他熒光染料如SYBR Green I 相比,，LyGreen具有如下突出優(yōu)點： 1）高靈敏度：在推薦濃度下使用時可以獲得比SYBR Green I 更強的信號,。 2）準確：飽和結(jié)合雙鏈DNA全部小溝位置,，變形時染料不遷移,，熒光信號準確反映雙鏈DNA變化情況；過量染料形成二聚體,，而不游離,，使得LyGreen對PCR的抑制遠小于SYBR Green I，因此,，使用LyGreen進行的qPCR實驗可以使用快速PCR步驟,。 3）高穩(wěn)定性：在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞,。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里,，也可以反復凍融。 4）安全性好：細胞膜穿透性測試表明,，LyGreen幾乎不能穿透細胞膜,，安全性高。 5）兼容性：和SYBR Green I 光譜相似,，使用不同品牌qPCR儀器時不許改變光譜元件設置,，也無需改變操作步驟，qPCR完成后,，無需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析,。 6）重復性好（如圖2.）：特殊設計染料，相同反應體系下,，熒光信號釋放僅與雙鏈濃度有關(guān),，線性。
圖2.： LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析. HRM分析設備為LightCycler@480熒光定量PCR儀(德國羅氏)
產(chǎn)品信息
三,、PikoGreen——一種極為靈敏的雙鏈DNA定量熒光染料,。
對微量的雙鏈 DNA 進行定量在各種生物學應用中都顯得非常重要,例如 cDNA 文庫的構(gòu)建；用于亞克隆的 DNA 片段的純化,；定量 DNA 擴增產(chǎn)物,在藥物中DNA 分子殘留的測定等 ,。
Picogreen染料是一種dsDNA定量熒光染料，基本不受ssDNA和RNA的影響,，并且可以耐受一定濃度的鹽,、尿素、乙醇、氯仿,、去垢劑,、蛋白等干擾。目前使用Picogreen染料定量檢測DNA已經(jīng)廣泛用于生物學檢測,，并被2010年版《中華人民共和國藥典》選為藥物殘留DNA定量方法,。但是價格貴，貨期長,，假貨魚目混珠等在市場上普遍存在,。
PikoGreen是李記生物自主研發(fā)的一款新型dsDNA定量熒光染料，其檢測靈敏度高,，可檢測到pg級DNA,；檢測范圍寬，可跨越４個數(shù)量級,；特異性好,。在低檢測限，穩(wěn)定性等方面全面超越PicoGreen, 是PicoGreen的替代產(chǎn)品,，價格僅為PicoGreen的1/2. PikoGreen具有如下突出優(yōu)點： 1）靈敏：數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感,，可節(jié)省樣品； 2）特異性強：只結(jié)合dsDNA,，特異性強,，不受樣品常規(guī)污染影響。傳統(tǒng)紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA,，蛋白,，RNA等影響； 3）耐受性好：耐受較高濃度的鹽,、尿素,、乙醇、氯仿,、去垢劑,、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴增產(chǎn)物而無需從反應混合物中純化DNA,。 4）線性范圍寬：PikoGreen dsDNA染料測定DNA濃度,，在100pg/ml-100ng/ml范圍內(nèi)呈良好線性；熒光計兼容,。 5）容易使用：在樣品中加入染料,，等待5-6分鐘染色，然后讀數(shù)即可,，且適用于96和384孔板,；與大多數(shù)基于熒光的酶標儀和可適用于各種DNA樣品分析,，PCR的分析、芯片樣品,、DNA損傷分析,、酶活性分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領域,。 6）PikoGreen dsDNA檢測dsDNA的線性關(guān)系良好!（見圖3,、圖4、圖5）
圖 3.PikoGreen Broad Range dsDNA （Ex/Em 350/460nm）檢測不同類型dsDNA,，表現(xiàn)出良好線性關(guān)系,。
圖 4.分別使用PikoGreen Broad Range dsDNA 和Quant-iT檢測calf thymus DNA，顯示 PikoGreen dsDNA 測得的 DNA 樣本線性關(guān)系更好,，且動態(tài)測量范圍更廣
圖5. 用PikoGreen Broad Range dsDNA梯度標準calf thymus DNA溶液所做的線性回歸分析,。
產(chǎn)品信息
四,、李記生物研發(fā)部特別提醒：
在生物技術(shù)飛速發(fā)展的今天,，從事分子生物學研究的科員人員幾乎每天都與核酸打交道，各種核酸染料也如食品中的味精*,。不管我們對安全染料多么有信心,，也不管您選擇何種EB替代產(chǎn)品，總之還是奉勸大家牢記----珍愛生命,，請帶手套,。一時半會兒看不出問題，可年輕的我們,，來日方長呢,！還有,各種染料染色后的廢棄試劑，請盡可能的規(guī)范處理,，請做個負責任的實驗人,。
9
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務