細(xì)胞增殖是活細(xì)胞的重要?理功能之?,，細(xì)胞增殖與細(xì)胞活性檢測(cè)所用的方法相近,，但實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌＜?xì)胞增殖是通過(guò)細(xì)胞增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)判斷細(xì)胞的數(shù)量變化,，例如細(xì)胞計(jì)數(shù)法,，反應(yīng)的就是細(xì)胞真實(shí)的數(shù)量。而細(xì)胞活性檢測(cè),，則是通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞受到藥物或其他措施處理后，標(biāo)志物產(chǎn)量或濃度的變化,，進(jìn)而判斷藥物或處理措施的作用,，細(xì)胞活性檢測(cè)所得結(jié)論，往往反映了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的目的,。
細(xì)胞增殖檢測(cè),，因檢測(cè)標(biāo)志物的不同，目前大致分為四類(lèi)：DNA合成檢測(cè),、代謝活性檢測(cè),、細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測(cè)和ATP濃度檢測(cè)。細(xì)胞活性檢測(cè)通常包括細(xì)胞膜對(duì)核酸染料的通透性,、代謝活性,、膜電位等的檢測(cè)，確定細(xì)胞的代謝活?或細(xì)胞代謝產(chǎn)物,，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞的氧化還原活性反映細(xì)胞增殖能?,。
1.DNA合成檢測(cè)——BrdU / EdU檢測(cè)法
細(xì)胞在增殖過(guò)程中,，DNA的倍增,，是顯著的變化之一，通過(guò)檢測(cè)DNA量的變化,，可判斷細(xì)胞數(shù)量的變化,。通過(guò)檢測(cè)DNA進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)方法，除了同位素標(biāo)記DNA外,，常用的就是：BrdU / EdU檢測(cè)法,。BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶（T）的衍生物，可代替胸腺嘧啶在摻入S期的DNA合成，然后利用抗Brdu的單克隆抗體,，ICC染色,，顯示增殖細(xì)胞，如果與其它細(xì)胞標(biāo)記物進(jìn)行雙染,，則可判斷增殖細(xì)胞的種類(lèi),，增殖速度，對(duì)研究細(xì)胞動(dòng)力學(xué)有重要意義,。
Edu檢測(cè)法是BrdU的替代方法,，也是目前更廣泛適用的方法，RrdU需抗體在破開(kāi)DNA雙聯(lián)后與抗原分子集合后才能顯示,，這個(gè)處理過(guò)程對(duì)細(xì)胞有損傷,，而EdU同樣可以代替胸腺嘧啶（T）滲入DNA，但其分子大小只有BrdU的1/500,，可以直接在DNA雙鏈形態(tài)下與染料分子結(jié)合用于檢測(cè),，無(wú)需抗體結(jié)合反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程簡(jiǎn)單,，對(duì)細(xì)胞損傷小,，是新一代基于DNA檢測(cè)時(shí)報(bào)增殖的試劑。
2.代謝活性物質(zhì)檢測(cè)——MTT,、CCK8
MTT與CCK8兩種方法都是利用檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)線(xiàn)粒體中琥珀酸脫氫酶濃度,，進(jìn)而反映細(xì)胞增殖活性。MTT(3-(4,，5-二甲基噻唑-2)-2,，5-二苯基四氮唑溴鹽)被琥珀酸脫氫酶還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（formazan）并堆積在細(xì)胞內(nèi)，然后以DMSO溶解甲瓚,，通過(guò)檢測(cè)甲瓚的吸光度來(lái)間接反映存活細(xì)胞的相對(duì)數(shù)量,。
CCK8中的主要物質(zhì)WST-8是一種類(lèi)似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下,，可以被線(xiàn)粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶還原生成橙黃色的,、水溶性formazan。細(xì)胞增殖越多越快,，則顏色越深,；反之，則顏色越淺,。CCK-8的原理跟MTT其實(shí)是相同的,，不同之處在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培養(yǎng)液加入有機(jī)溶劑溶解這個(gè)步驟,，對(duì)細(xì)胞毒性小,，可進(jìn)行活細(xì)胞動(dòng)態(tài)測(cè)定，試劑穩(wěn)定即開(kāi)即用，重復(fù)性好于MTT,。
3.細(xì)胞增殖相關(guān)抗原檢測(cè)
Ki-67,PCNA都是細(xì)胞增殖因子,，在細(xì)胞異常增殖中均有顯著的表達(dá)差異，是研究腫瘤細(xì)胞增殖的重要核抗原,。Ki-67,PCNA均與細(xì)胞周期密切相關(guān),，通過(guò)免疫反應(yīng)檢測(cè)Ki-67,PCNA可反應(yīng)腫瘤細(xì)胞增殖情況。
4.ATP濃度檢測(cè)
細(xì)胞內(nèi)的ATP是細(xì)胞能量的重要來(lái)源,，其含量與細(xì)胞周期和細(xì)胞狀態(tài)關(guān)系密切,，死細(xì)胞或?yàn)l臨死亡的細(xì)胞幾乎不含ATP。在細(xì)胞中測(cè)得的ATP濃度與細(xì)胞數(shù)之間存在嚴(yán)格的線(xiàn)性關(guān)系,。利用熒光素酶Luciferase及其底物熒光素Luciferin的ATP檢測(cè)以生物發(fā)光為基礎(chǔ),，能夠?yàn)槟峁┓浅ｌ`敏的結(jié)果。如果有ATP存在熒光素酶就會(huì)發(fā)光,，而且其發(fā)光強(qiáng)度與ATP濃度成正比,，這種方法非常適用于高通量細(xì)胞增殖檢測(cè)和篩選。Promega公司開(kāi)發(fā)的CellTiter-Glo Luminescent 實(shí)現(xiàn)了"加樣－混合－測(cè)量"的簡(jiǎn)單快速檢測(cè)模式,，CellTiter-Glo試劑和細(xì)胞培養(yǎng)中的常用培養(yǎng)基兼容,，如RPMI 1640, MEM, DMEM, 和Ham's F12，且不受酚紅和有機(jī)溶劑的影響,，可用于高通量自動(dòng)化篩選（HTS）。
5.羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂（CFSE）檢測(cè)法
羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂（CFSE）是一種可穿透細(xì)胞膜的熒光染料,，具有與細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)特異性結(jié)合的琥珀酰亞胺脂基團(tuán)和具有非酶促水解作用的羥基熒光素二醋酸鹽基團(tuán),，CFSE進(jìn)入細(xì)胞后可以不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上。當(dāng)細(xì)胞分裂時(shí),，CFSE標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中,，子代細(xì)胞熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半，在一個(gè)增殖的細(xì)胞群中,，各連續(xù)代細(xì)胞的熒光強(qiáng)度遞減,，利用流式細(xì)胞儀在488nm激發(fā)光和熒光檢測(cè)通道可對(duì)其進(jìn)行分析。
常見(jiàn)細(xì)胞增殖/活性檢測(cè)方法比較見(jiàn)下表（含李記生物產(chǎn)品,、貨號(hào)）
| 檢測(cè)試劑 | 試劑盒原理 | 適用樣本 | 檢測(cè)設(shè)備 | 生產(chǎn)廠(chǎng)家 |
| EdU/BrdU檢測(cè)試劑盒（李記新品：AC11L251） | 檢測(cè)新新合成DNA，在細(xì)胞增殖過(guò)程,，檢測(cè)加入到新合成DNA的胸苷類(lèi)似物（BrdU, EdU） | 細(xì)胞樣本或組織樣本 | 流式細(xì)胞術(shù) 或 成像分析 或 酶標(biāo)儀 | 李記生物 GeneCopoeia |
| CFDA, SE 細(xì)胞增殖示蹤熒光探針（李記貨號(hào)：AC11L101） | 通過(guò)檢測(cè)親代和子代細(xì)胞中染料CFSE濃度進(jìn)行細(xì)胞增殖次數(shù)分析 | 細(xì)胞樣本 | 流式細(xì)胞術(shù) | 李記生物 Thermofisher |
| Cell Counting Kit（CCK-8 試劑盒）（李記貨號(hào)：AC11L054） | 通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)琥珀酸脫氫酶的還原能力,，反應(yīng)細(xì)胞活性。檢測(cè)細(xì)胞還原能力熒光信號(hào)與代謝中的活細(xì)胞數(shù)量成正比 | 細(xì)胞樣本,，HTS | 酶標(biāo)儀 | 李記生物 日本東仁化學(xué) |
| AlamarBlue細(xì)胞活性檢測(cè) | 染料分子在細(xì)胞內(nèi)被還原后釋放到胞外,，檢測(cè)熒光，提示細(xì)胞代謝變化 | 細(xì)胞樣本，HTS | 酶標(biāo)儀 | 李記生物 Thermofisher |
| CTG CellTiter-Glo （李記研發(fā)中） | ATP使熒光素酶發(fā)射熒光 | 細(xì)胞樣本,HTS | 酶標(biāo)儀 | 李記生物 Promega |
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