分析型液相色譜系統(tǒng)是有五大部分構(gòu)成:動力系統(tǒng),,進(jìn)樣系統(tǒng),,分離系統(tǒng),,檢測系統(tǒng),,數(shù)據(jù)分析和記錄系統(tǒng)構(gòu)成。其中動力系統(tǒng)是指泵,;進(jìn)樣系統(tǒng)是指六通閥和進(jìn)樣針,,或者自動進(jìn)樣器;分離系統(tǒng)是指色譜柱;檢測系統(tǒng)是指檢測器,,一般有紫外檢測器,,熒光檢測器,示差折光檢測器,,MS檢測器等等,;記錄系統(tǒng)是指電腦工作站等,而連接這些設(shè)備的都是由一根根不銹鋼管或者PEEK管構(gòu)成,。
1,、動力系統(tǒng):
分析型液相色譜系統(tǒng)的動力,實(shí)際上是鋼瓶中氣體的壓力,。而液體,它只有通過泵的轉(zhuǎn)動而使之流動,。我們做一個類比:血液類比成流動相,,心臟類比成泵。血管類比成各不銹鋼管,。那么,,血液在心臟作為動力系統(tǒng),流經(jīng)著身體的各個系統(tǒng),。如果心臟跳得快點(diǎn),,那么血流量加大,那么血壓升高,。同樣,,泵流速提高,流動相流量增大,,那么色譜系統(tǒng)壓力增高,;如果血管被壓迫半堵了,那么同樣的心跳速度,,壓力也會增高,。同樣道理,如果色譜系統(tǒng)被污染,,那么污染物堵在色譜柱頭,,或者各連接口等,那么泵同樣的流速,,就有可能壓力變大,。液相色譜主要出問題的就是壓力莫名地增大,一般認(rèn)為是色譜系統(tǒng)被污染而堵,,解決的方法就是查看各個部件,,或者用過濾過的異丙醇清洗流路等。
2、進(jìn)樣系統(tǒng):
現(xiàn)在很少用到手動進(jìn)樣了吧,。大部分都用自動進(jìn)樣,。自動進(jìn)樣確實(shí)方便,只要安排好配制過的樣品的位次,,那么開動sequence run 就一個個地分析了,。要不說說手動進(jìn)樣吧。進(jìn)樣設(shè)備是一個六通閥,。其中要進(jìn)樣的時候,,需要將六通閥轉(zhuǎn)到load狀態(tài),由于六通閥后面裝了一根定量環(huán),,所以,,樣品一定以大于三倍定量環(huán)體積地進(jìn)去,這樣,,保證定量環(huán)中充滿著樣品,,可以避免進(jìn)樣誤差。打個比方,,如果定量環(huán)是20μl的,,那么我們打入>60μl的樣品。然后轉(zhuǎn)到inj狀態(tài),,即可,。還有需要注意的是,HPLC 的進(jìn)樣針是平頭針,,而GC的進(jìn)樣針一定是尖頭針,。因?yàn)闅庀噙M(jìn)樣要刺穿隔墊,需呀尖頭,,而尖頭容易劃傷金屬,,所以分析型液相色譜系統(tǒng)用的是平頭針。
3,、分離系統(tǒng):
分離系統(tǒng)是分析型液相色譜系統(tǒng)的核心,。我們現(xiàn)實(shí)生活中需要分析的樣品都是混合物。所以,,分離后在分析,。比如我們分析醬油中肌苷酸鳥苷酸,那么醬油進(jìn)行稀釋處理,,注入色譜儀,,肌苷酸,鳥苷酸由于性質(zhì)不同被分離成兩個峰,。同時醬油中其他物質(zhì)也被分離,。使得肌苷酸,,鳥苷酸兩個峰十分清楚地呈現(xiàn)。我們需要清楚的是,,樣品的測試要保證測試的物質(zhì)被有效地分離,,而不需要測試的物質(zhì),沒有必要讓其分離,,這可以節(jié)省分析時間,。
4、檢測系統(tǒng):
HPLC的檢測器有紫外-可見檢測器,,(UV-VIS),,熒光檢測器(FD),示差折光檢測器(RI),MS檢測器等等對于這些檢測器,簡單來說,,是兩點(diǎn):被檢測和濃度越大面積越大,。對于示差折光,它是通用性檢測器,,但是靈敏度不夠,。測試一些沒有紫外基團(tuán)的物質(zhì),比如如糖等,。
5、記錄系統(tǒng):
分析型液相色譜系統(tǒng)記錄系統(tǒng)主要記錄色譜圖,,并且對色譜圖進(jìn)行面積計(jì)算(積分),。同時可以用軟件計(jì)算出其他,比如峰寬,,塔板數(shù),,拖尾因子等。同時也可以通過輸入稱樣量和稀釋倍數(shù),,計(jì)算出測試樣品中各組分的含量,。