高效液相色譜柱由高壓液體泵分離系統(tǒng)、檢測(cè)器及液相色譜柱（含柱溫控制系統(tǒng)）等三部分組成,。其中液相色譜柱是液相色譜工作的關(guān)鍵,，液相色譜柱的性能直接關(guān)系到分離分析的準(zhǔn)確性與適用性。

　　高效液相色譜柱峰形后拖尾是什么原因造成的?

　　1.柱物理?yè)p壞

　　色譜柱有物理?yè)p壞是造成峰形拖尾的根源,。解決方法就是更換新柱,。

　　2.柱內(nèi)填料污染

　　流動(dòng)相和樣品中的雜質(zhì)是色譜柱主要污染源。

　　流動(dòng)相所用的各種溶劑至少是分析純,，盡量使用色譜純?cè)噭?。流?dòng)相所用的水要是超純水或全玻璃器皿雙蒸水。用前先用0.45um溶劑微孔過(guò)濾(器)過(guò)濾,，除去可能存在的微粒,。流動(dòng)相建議現(xiàn)用現(xiàn)配，對(duì)于含鹽的溶液尤其注意長(zhǎng)置會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌或出現(xiàn)沉淀,。此外還得保證儲(chǔ)存流動(dòng)相的容器清潔,。

　　復(fù)雜樣品可選用0.45um溶劑微孔過(guò)濾(器)或樣品預(yù)處理柱對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理，確保樣品中不含微粒雜質(zhì),。若樣品不便處理,，要使用保護(hù)柱。柱內(nèi)填料污染時(shí),，可將柱頭螺絲卸下,，用工具挖出柱內(nèi)前段被污染填料，再以相同的填料重新填入,，修復(fù),。或以能溶解污染物的流動(dòng)相按色譜柱使用的相反方向,，沖洗色譜柱(約20至30倍柱體積,，或視具體情況而定；另外,，此時(shí)不能接檢測(cè)器),，將污染物沖出色譜柱，再按色譜柱標(biāo)明的使用方向使用,。

　　3.柱進(jìn)口處有異物

　　當(dāng)斷定是柱進(jìn)口處有異物時(shí),，可將柱頭螺絲卸下,，取出濾帽并將其置于20%硝酸溶液中，用超聲波清洗約20分鐘,，再置于超純水中,，并用超聲波清洗約10分鐘，重新裝入色譜柱內(nèi)即可,。

　　4.樣品濃度過(guò)高致使柱超載

　　樣品在柱上超載能引起峰展寬,，拖尾(或伸舌)。

　　適當(dāng)減小進(jìn)樣量或樣品濃度(需要時(shí),，可提高檢測(cè)器靈敏度)直至峰形和保留時(shí)間不再改變,，便可消除這種不良影響。減小進(jìn)樣量還能改善其分離度,。正常情況下,，樣品中每種化合物在150×4.6mm柱中進(jìn)樣量保持在3～50ug范圍內(nèi)，不會(huì)引起明顯超載,。

　　5.樣品溶劑不對(duì)

　　選擇合適的樣品溶劑,，以排除不必要的干擾。要選用流動(dòng)相溶解樣品,。

　　6.柱外效應(yīng)

　　柱外效應(yīng)(即進(jìn)樣閥,、色譜柱及檢測(cè)器間的管路過(guò)長(zhǎng)、直徑過(guò)粗,、管路接頭不匹配,、有死體積)是影響色譜柱柱效的主要因素之一。所以在可能的條件下,，色譜柱的兩端連接管路要盡可能短,，連接管內(nèi)徑盡可能細(xì)小，切口務(wù)必平整光滑,，盡可能的減小死體積,，以防止因樣品擴(kuò)散造成不能反映色譜柱真實(shí)柱效等情況發(fā)生。

　　7.緩沖不足或不合適

　　在緩沖不好或離子強(qiáng)度過(guò)低的分離中,，也會(huì)出現(xiàn)保留時(shí)間重現(xiàn)性差和峰形拖尾,。增加緩沖濃度(與樣品大小相匹配)能改善此情況。

　　8.硅醇基團(tuán)作用

　　仔細(xì)分析色譜柱內(nèi)填料表面性質(zhì)可知：反相色譜柱填料的表面大約被鍵合相覆蓋了一半,，其余的就是未被鍵合的硅醇基團(tuán),。所謂的保留是指樣品分子與鍵合相相互作用的結(jié)果。但是,，酸性或堿性化合物與硅膠表面殘存的硅醇基團(tuán)或金屬雜質(zhì)之間相互作用而引起雙重保留機(jī)理,，因此，發(fā)生了峰形拖尾。

　　為了減小峰形拖尾,，通?？稍诹鲃?dòng)相加入25mM三乙胺(抑制劑)。三乙胺能與硅醇基團(tuán)發(fā)生強(qiáng)烈的相互作用,，從而降低或阻斷樣品分子與硅醇基團(tuán)的作用，以保證保留機(jī)理正常進(jìn)行,，并大大緩解了峰形拖尾,。使用長(zhǎng)鏈的硅醇基抑制劑，雖起效較慢,，但持續(xù)力較三乙胺長(zhǎng),。因?yàn)橐种苿┓肿又谐税坊c硅醇基團(tuán)發(fā)生極性作用外，大分子中非極性部分與固定相也會(huì)發(fā)生反相作用而產(chǎn)生保留現(xiàn)象,。如果將抑制劑加至樣品中,，效果會(huì)顯著。

　　9.柱內(nèi)金屬污染

　　柱內(nèi)金屬污染(Fe,，Ni等)可引起某引些化合物峰形拖尾,。金屬可由填料本身帶進(jìn)，也可由腐蝕性流動(dòng)相緩慢溶解柱進(jìn)口的金屬濾片,，隨流動(dòng)相沉積到柱填料中,。例如C18柱填料被金屬污染后，造成酸性/堿性樣品拖尾,，可用堿洗/酸洗后再鍵合的填料,，得到的峰是尖銳且對(duì)稱的。