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高效液相色譜柱峰形后拖尾是什么原因造成的?
高效液相色譜柱由高壓液體泵分離系統(tǒng),、檢測器及液相色譜柱（含柱溫控制系統(tǒng)）等三部分組成,。其中液相色譜柱是液相色譜工作的關(guān)鍵,，液相色譜柱的性能直接關(guān)系到分離分析的準(zhǔn)確性與適用性,。
高效液相色譜柱峰形后拖尾是什么原因造成的?
1.柱物理損壞
色譜柱有物理損壞是造成峰形拖尾的根源,。解決方法就是更換新柱。
2.柱內(nèi)填料污染
流動相和樣品中的雜質(zhì)是色譜柱主要污染源,。
流動相所用的各種溶劑至少是分析純,，盡量使用色譜純試劑。流動相所用的水要是超純水或全玻璃器皿雙蒸水,。用前先用0.45um溶劑微孔過濾(器)過濾,，除去可能存在的微粒。流動相建議現(xiàn)用現(xiàn)配,，對于含鹽的溶液尤其注意長置會產(chǎn)生細(xì)菌或出現(xiàn)沉淀,。此外還得保證儲存流動相的容器清潔。
復(fù)雜樣品可選用0.45um溶劑微孔過濾(器)或樣品預(yù)處理柱對樣品進(jìn)行預(yù)處理,，確保樣品中不含微粒雜質(zhì),。若樣品不便處理，要使用保護(hù)柱,。柱內(nèi)填料污染時,，可將柱頭螺絲卸下，用工具挖出柱內(nèi)前段被污染填料,，再以相同的填料重新填入,，修復(fù)?；蛞阅苋芙馕廴疚锏牧鲃酉喟瓷V柱使用的相反方向,，沖洗色譜柱(約20至30倍柱體積，或視具體情況而定,；另外,，此時不能接檢測器)，將污染物沖出色譜柱,，再按色譜柱標(biāo)明的使用方向使用,。
3.柱進(jìn)口處有異物
當(dāng)斷定是柱進(jìn)口處有異物時，可將柱頭螺絲卸下,，取出濾帽并將其置于20%硝酸溶液中,，用超聲波清洗約20分鐘，再置于超純水中,，并用超聲波清洗約10分鐘，重新裝入色譜柱內(nèi)即可,。
4.樣品濃度過高致使柱超載
樣品在柱上超載能引起峰展寬,，拖尾(或伸舌)。
適當(dāng)減小進(jìn)樣量或樣品濃度(需要時,，可提高檢測器靈敏度)直至峰形和保留時間不再改變,，便可消除這種不良影響。減小進(jìn)樣量還能改善其分離度。正常情況下,，樣品中每種化合物在150×4.6mm柱中進(jìn)樣量保持在3～50ug范圍內(nèi),，不會引起明顯超載。
5.樣品溶劑不對
選擇合適的樣品溶劑,，以排除不必要的干擾,。要選用流動相溶解樣品。
6.柱外效應(yīng)
柱外效應(yīng)(即進(jìn)樣閥,、色譜柱及檢測器間的管路過長,、直徑過粗、管路接頭不匹配,、有死體積)是影響色譜柱柱效的主要因素之一,。所以在可能的條件下，色譜柱的兩端連接管路要盡可能短,，連接管內(nèi)徑盡可能細(xì)小,，切口務(wù)必平整光滑，盡可能的減小死體積,，以防止因樣品擴(kuò)散造成不能反映色譜柱真實(shí)柱效等情況發(fā)生,。
7.緩沖不足或不合適
在緩沖不好或離子強(qiáng)度過低的分離中，也會出現(xiàn)保留時間重現(xiàn)性差和峰形拖尾,。增加緩沖濃度(與樣品大小相匹配)能改善此情況,。
8.硅醇基團(tuán)作用
仔細(xì)分析色譜柱內(nèi)填料表面性質(zhì)可知：反相色譜柱填料的表面大約被鍵合相覆蓋了一半，其余的就是未被鍵合的硅醇基團(tuán),。所謂的保留是指樣品分子與鍵合相相互作用的結(jié)果,。但是，酸性或堿性化合物與硅膠表面殘存的硅醇基團(tuán)或金屬雜質(zhì)之間相互作用而引起雙重保留機(jī)理,，因此,，發(fā)生了峰形拖尾。
為了減小峰形拖尾,，通?？稍诹鲃酉嗉尤?5mM三乙胺(抑制劑)。三乙胺能與硅醇基團(tuán)發(fā)生強(qiáng)烈的相互作用,，從而降低或阻斷樣品分子與硅醇基團(tuán)的作用,，以保證保留機(jī)理正常進(jìn)行，并大大緩解了峰形拖尾,。使用長鏈的硅醇基抑制劑,，雖起效較慢，但持續(xù)力較三乙胺長,。因?yàn)橐种苿┓肿又谐税坊c硅醇基團(tuán)發(fā)生極性作用外,，大分子中非極性部分與固定相也會發(fā)生反相作用而產(chǎn)生保留現(xiàn)象,。如果將抑制劑加至樣品中，效果會顯著,。
9.柱內(nèi)金屬污染
柱內(nèi)金屬污染(Fe,，Ni等)可引起某引些化合物峰形拖尾。金屬可由填料本身帶進(jìn),，也可由腐蝕性流動相緩慢溶解柱進(jìn)口的金屬濾片,，隨流動相沉積到柱填料中。例如C18柱填料被金屬污染后,，造成酸性/堿性樣品拖尾,，可用堿洗/酸洗后再鍵合的填料，得到的峰是尖銳且對稱的,。