色譜填料的選擇范圍很寬,,要做合適的選擇,,必須對此有一定的認識和了解。
一、硅膠基質填料
1,、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠以及其它具有極性官能團,,如胺基團和氰基團的鍵合相填料。
由于硅膠表面的硅羥基或其它極性基團極性較強,,因此,,分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小,即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱,。
正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,,如:正己烷、二甲烷等,。
2,、反相色譜
反相色譜用的填料常是以硅膠為基質,表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相,。反相色譜所使用的流動相極性較強,,通常為水、緩沖液與甲醇,、乙腈等的混合物,。
樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份zui先被沖洗出,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留,。
二,、聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等,其主要優(yōu)點是在pH值為1~14均可使用,。
相對于硅膠基質的C18填料,,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。
現(xiàn)有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料,,色譜柱柱效較低,。
三、其它無機填料
其它HPLC的無機填料色譜柱也已經(jīng)商品化,。由于其特殊的性質,,一般于特殊的用途。如,,石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料,。這種填料的分離不同于硅膠基質烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎,,不再需其它的表面改性,。
該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構體,,又由于在HPLC流動相中不會被溶解,,這類柱可在任何pH與溫度下使用。
氧化鋁也可用于HPLC,,氧化鋁微粒剛性強,,可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,其優(yōu)點是可在pH高達12的流動相中使用,。
但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強,,應用范圍受到一定的限制,所以未能廣泛應用,。新型氧化鋯基質色譜填料也可用于HPLC,,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應用pH范圍1~14,,溫度可達100℃,。
由于氧化鋯填料是zui近幾年才開始研究,加之面臨的實驗難度,,其重要用途與優(yōu)勢尚在進行中,。