10
當(dāng)前位置：大連依利特分析儀器有限公司>>技術(shù)文章>>分析國產(chǎn)液相色譜不是堵就是漏的問題,！
分析國產(chǎn)液相色譜不是堵就是漏的問題,！
使用國產(chǎn)液相色譜儀的小伙伴肯定會遇到漏氣和漏液的狀況,，流動相是造成液相色譜各種問題的主要源頭。國產(chǎn)液相色譜常見的故障一是堵,，二是漏,。今天就這兩部分別展開討論,。
為何會堵？“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高,，直接原因就是流路不暢,。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，主要原因就是流動相里有雜質(zhì),，雜質(zhì)的主要來源就是細(xì)菌,。
1、純水中的細(xì)菌污染
我們要認(rèn)識到,，一般的其實不需要額外過濾處理,，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì),，也能在液相流路系統(tǒng)前端的過濾頭上排除,，真正容易引起問題的，是水中的細(xì)菌,。新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會長菌,，而這些細(xì)菌雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙,，造成柱子很快報廢,。這就是在配制流動相時造成的細(xì)菌污染的原因，解決它的方法很簡單,，就是確保水的可靠性,。
國產(chǎn)液相色譜解決辦法：
(1)理想的方式當(dāng)然是購買實驗室純水機，既方便又可靠,，質(zhì)量也放心,。缺點就是價格不菲。
(2)成箱購買市售純凈水,，如500ml的怡寶或娃哈哈,，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。先隨機抽取一瓶做一下細(xì)菌平板實驗,，待菌落數(shù)合格方可使用,。這樣每次只要單獨開一瓶即可，也很方便,。每次成本2元左右,。這里特別指出一個細(xì)節(jié)：在絕大多數(shù)書本上，凡談到配制流動相都會談到后一個過濾的步驟,。但是從我們長期使用的實際效果來說,，只要能保證水的質(zhì)量，這一步*可以也應(yīng)當(dāng)去除。
水有保證,，可以不過濾,？
(1)流動相過濾在理論上有好處，但是實際操作時由于不可能做到專瓶,，反而容易造成的交叉污染,，對于配比復(fù)雜的流動相影響更大。
(2)流動相過濾在經(jīng)濟成本上不劃算,。買一套過濾裝置要6000多元,，且過濾器*是比較容易損壞的設(shè)備。主要是過濾片的成本太高,，一片就要幾十元,。按一般液相柱的正常使用壽命計算，過濾片的成本會遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本上升,。
2,、流動相的細(xì)菌污染
流動相剛開始不長菌，在使用時卻產(chǎn)生了細(xì)菌污染,。這主要是在使用多元液相色譜儀時的一種不良使用習(xí)慣造成的,。舉簡單的例子：50%的水流動相，有兩種使用方式,。一種方式是在上機前就配好混合在一起,，另一種方式是在流路A放純，流路B放純水,。從單純實驗效果來說,，后一種有明顯的優(yōu)點：首先是簡單，不需要實驗者另個計算配比混合,，其次就是比例準(zhǔn)確,，能得到保留時間重復(fù)性實驗效果。
但是,，液相色譜有一個致命的缺陷，就是純水在流動相瓶中幾天時間就會長細(xì)菌(很多情況下不僅僅用純水作流動相,，而是用緩沖鹽溶液,，本身就是肥料，細(xì)菌長得更迅速),，一旦有細(xì)菌柱子就壞得很快,。所以這種方式要求操作人員每次實驗都要用新制備的純水，更要求在每次實驗后把水相換掉,，換成沖洗干凈,，這一點在實際工作中很多人意識不強，就是意識到了但多次使用中總有一兩次會遺漏，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響,。因為液相色譜柱的堵塞是不可逆的,。
所以，寧可犧牲小小的保留時間的重復(fù)性,，也不要用純水溶液作為流動相,。從實際實驗效果來說，我建議用10%的水代替水溶液(以前我做過不同比例水的細(xì)菌總數(shù)實驗,，在5%就基本可以抑菌,，在10%及以上就可以*殺菌了)，這樣可以有效排除長細(xì)菌的隱患,，既可作流動相,，也可沖柱。就算是在配制流動相時會計算得麻煩一些,，但是一次麻煩,，終身受益。
3,、液相色譜不適當(dāng)操作
(1)在更換零件時選擇的型號有誤,，接口不是很匹配，在擰緊的時候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞,。
(2)樣品處理液凈化得不干凈,，長期會在六通閥和柱之間形阻塞不暢。
(3)在使用用手動六通閥時,，有些人可能由于手勁小的原因,，轉(zhuǎn)動的不到位，于是造成流路形成死堵,，壓力快速升高超過警戒值,。
(4)在使用金屬管路作出廢液管時，應(yīng)當(dāng)注意廢液瓶中先放一些水,，并把廢液管的出口端結(jié)晶成塊并造成堵塞,。這種情況不常見，但卻的確發(fā)生過,。