液相色譜技術(shù)的廣泛應(yīng)用也得力于近年來各種色譜填料技術(shù)的發(fā)展為色譜分離提供了越來越多樣的選擇性。近年來人們制備了大量的含有不同鍵合基團的色譜填料以增強色譜柱的選擇性，從而滿足實際樣品分離的需要,，例如親水作用色譜(HILIC)填料、立體保護鍵合色譜填料,、極性嵌入反相色譜填料,、有機-無機雜化色譜 填料、親水性體積排阻色譜填料,、混合模式色譜填料,、手性色譜填料以及聚合物基質(zhì)色譜柱填料等。近年來,，液相色譜填料技術(shù)具有越來越豐富的選擇性,。 
 

1、HILIC色譜填料,。它采用極性固定相和含有一定水的水溶性有機溶劑為流動相,，不僅克服了正相色譜和反相色譜對極性化合物分離的不足，而且提供了與反相色譜截然不同選擇性,，在強 極性和離子型化合物如氨基酸,、碳水化合物和多肽等的分離中發(fā)揮著重要作用。并且,，由于其流動相含有高濃度的有機溶劑,，有利于增強電噴霧離子源質(zhì)譜的離子化 效率，進而提高其靈敏度,，與質(zhì)譜具有很好的兼容性,。過去5-6年HILIC模式色譜柱的應(yīng)用增長非常快。目前商品化的HILIC色譜填料種類繁多,，基于硅膠基質(zhì)的HILIC填料包括裸硅膠,、氨基、氰基,、二醇基,、酰胺型以及兩性離子型等。
 

2,、極性嵌入反相色譜填料,。它通過在硅膠鍵合烷基鏈的中下部鑲嵌一些極性基團，如烷基胺,、酰胺,、季銨或者氨基甲酸酯等極性基團來降低未反應(yīng)硅醇基活性和改善對極性化合物的保留能力。這種填料具有的大優(yōu)勢是減少了填料表面游離硅羥基與堿性化合物間的“次級保留”作用,，從而改善堿性化合物峰型的拖尾,，而且由于極性基團的嵌入，增強了對極性化合物的保留,，提供和普通C18很不一樣的選擇性,。
 

3、立體保護鍵合相,。它是在硅膠的烷基鏈側(cè)鏈鍵合含異丙基和異丁基的C18固定相,。由于在C18烷基鏈上引入了較大的基團以及立體效應(yīng)，阻礙了硅醇基與分析物的相互作用,，因而對 堿性化合物的分離呈現(xiàn)出對稱的峰型并具有良好的柱效,，防止堿性化合物在色譜柱上的拖尾，并且在低pH值時有較高的水解穩(wěn)定性,。
 

4,、有機-無機雜化色譜填料。它是在超高純?nèi)嗫坠枘z微球基質(zhì) 表面涂覆一層厚度均勻的有機-無機雜化層,，進而提高填料的pH耐受范圍和應(yīng)用能力的一種填料,。這種類型的填料能夠耐受pH 值很高的流動相，并且具有很好的pH值穩(wěn)定性,，它的pH耐受范圍可以達到1.5-12,，而常規(guī)的硅膠基質(zhì)色譜填料pH值范圍一般僅為2-8;它能夠耐受各 種緩沖液體系，柱壽命長,。
 

5,、親水性體積排阻(SEC)色譜填料。它 是在超高純?nèi)嗫坠枘z表面包覆一層具有良好穩(wěn)定性的親水性聚合物的體積排阻色譜填料,，其填料的作用基團為二醇基,。其填料表面 因受二醇基官能團保護而不與蛋白質(zhì)相互作用,。使得蛋白、生物酶,、多肽等樣品的非特異性吸附極小;因而廣泛應(yīng)用于生物大分子的分離,。
 

6、混合模式色譜填料,。它是在一根色譜柱上實現(xiàn)兩種或多種分離機理共同主導(dǎo)的色譜柱填料,。混合模式色譜分離的基礎(chǔ)是色譜固定相能同時提供多種作用力,，如鍵合相同時包含烷基鏈和電荷 中心,，則可以提供疏水作用力和靜電作用力，實現(xiàn)反相和離子交換混合模式色譜分離,。由于多種作用力的存在,，混合模式色譜可以顯著地提高分離選擇性，這樣就可 以實現(xiàn)根據(jù)樣品的不同特性進行分離,。
 

7,、手性色譜填料。它是由具有光學(xué)活性的單體,，固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相,。通過引入手性環(huán)境 使對映異構(gòu)體間呈現(xiàn)物理特征的差異，從而達到光學(xué)異構(gòu)體拆分的目的,。一個有效的手性填料應(yīng)當具有能夠快速分離對映體,，測定對映體的純度，盡可能適應(yīng)多種類 型的對映體的分離;應(yīng)當具有較高的對映體分離選擇性和柱容量,。目前，手性填料主要有以下5大類: (1)多糖類手性色譜填料：主要包括纖維素和淀粉兩大類手性固定相;(2)大環(huán)手性色譜填料：主要是用大環(huán)分子和環(huán)糊精,、手性冠醚來形成的固定相;(3) 糖肽類手性固定相：主要是用萬古霉素,、利福霉素B等制成的手性固定相;(4)多肽或蛋白質(zhì)手性固定相;(5)配體交換手性固定相:建立在金屬配合物的配體 交換的基礎(chǔ)之上的固定相。
 

8,、后,，有機高分子基質(zhì)液相色譜填料也是一個非常活躍的領(lǐng)域,，主要分為多糖型基質(zhì)填料和聚合物型基質(zhì)填料,。同 硅膠基質(zhì)的填料相比，此類填料具備高負載量,、 高化學(xué)穩(wěn)定性(耐酸 ,、耐堿、耐溶劑處理),，對于生物大分子不易產(chǎn)生不可逆的非特性吸附作用等優(yōu)點,。這些優(yōu)點決定了其廣泛的應(yīng)用前景，特別是生物大分子的分離和分析。一般來 說,，有機高分子基質(zhì)色譜填料的柱效低于硅膠基質(zhì)的填料,。