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針對液相色譜柱的柱子清洗方法
1.液相色譜柱柱子的清洗
即使樣品和流動相已做過前處理,也仍難以完成避免柱子受到污染,,因此必須對柱子行清洗,。清洗應定期進行,如果在短期內分析許多樣品,,則以每日清洗一次為宜,,至少也應一周一次,防止有太多的雜質在柱上堆積,。
反相柱的常規(guī)洗滌辦法是:分別取甲醇,、三氯甲烷、甲醇-水各20倍柱體積(既對于一根4.6mmX25cm的柱來說,,通常是50-60ml,,而對于9.4mm內經X50cm的柱來說,通常是500-600ml) ,,使之通過柱子,。然后用流動相平衡(通常仍用20倍柱體積),柱一般將恢復正常,。如果選擇性仍和以前不一樣,,則表明還有其他雜質留在柱子里,這時應考慮更加嚴格的清洗:先用20倍柱體積的水,,再用相同體積0.05mol/L硫酸,,zui后用流動相溶劑。酸洗常能洗下有機溶劑所不能洗下的剩余雜質,。在低pH值下做長期(一天或更長)清洗是不適宜的,但50ml洗液以2ml/min的速度清洗25min,,一般對健合相沒有損害,。注意,強堿不能用來清洗任何微粒硅膠柱(不論是健合相還是非健合相),,因為硅膠骨架會溶解,。對于嚴重污染的反相柱,只能采用再生的方法,。
2.液相色譜柱柱頭空隙的處理
拆下不銹鋼燒結過濾器后,,檢查柱床,,常可見柱頭塌陷,,此時先剔掉無規(guī)則床層和帶色填料,,使柱床呈白色并*水平,再使甲醇作糊狀填料勻漿液,,將填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中排出甲醇液,,重復數次,直到水平,,完成了柱的再生,。此時,如果柱頭孔隙深度小于1cm,,可以采用下述局部重裝的辦法,,否則,柱應當*重裝或更換,。
柱入口局部重裝時采用的填料可以和原填料一樣,,也可以用玻璃珠。粒徑大于20um的可用敲打充填法干裝,。如果粒徑小于20um則要用合適的溶劑配成勻漿,,勻漿逐次加入,每次加入前都要使上一次加入的全部沉降,。把孔隙填滿后,,用刮刀將填料刮平,更換柱入口接頭,,把柱重新接到液相儀器上,,慢慢地增加流動相流速和系統壓力,直到操作上限為止,。讓相當于10-20 倍柱體積的流動相通過柱子,,然后逐漸降低流速,并使壓力降為零,,再把柱子卸下來,,并卸下入口接頭,觀察柱的入口,。此時孔隙應當減小,,但是由于新加入的填料在系統的操作壓力下壓入柱頭,孔隙不可能一次就被全部充滿,。重復上述重裝過程,,直到柱上加不進更多的填料為止。一旦柱子填充完畢,,可加進混合樣品,,測定柱子的性能是否已經改善,。
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