即使樣品和流動(dòng)相已做過前處理,,也仍難以完成避免柱子受到污染,,因此必須對(duì)柱子行清洗,。清洗應(yīng)定期進(jìn)行,,如果在短期內(nèi)分析許多樣品,則以每日清洗一次為宜,,至少也應(yīng)一周一次,,防止有太多的雜質(zhì)在柱上堆積。
反相柱的常規(guī)洗滌辦法是:分別取甲醇,、三氯甲烷,、甲醇-水各20倍柱體積(既對(duì)于一根4.6mmX25cm的柱來說,通常是50-60ml,,而對(duì)于9.4mm內(nèi)經(jīng)X50cm的柱來說,,通常是500-600ml) ,使之通過柱子,。然后用流動(dòng)相平衡(通常仍用20倍柱體積),柱一般將恢復(fù)正常,。如果選擇性仍和以前不一樣,,則表明還有其他雜質(zhì)留在柱子里,這時(shí)應(yīng)考慮更加嚴(yán)格的清洗:先用20倍柱體積的水,,再用相同體積0.05mol/L硫酸,,zui后用流動(dòng)相溶劑。酸洗常能洗下有機(jī)溶劑所不能洗下的剩余雜質(zhì),。在低pH值下做長(zhǎng)期(一天或更長(zhǎng))清洗是不適宜的,,但50ml洗液以2ml/min的速度清洗25min,一般對(duì)健合相沒有損害,。注意,,強(qiáng)堿不能用來清洗任何微粒硅膠柱(不論是健合相還是非健合相),因?yàn)楣枘z骨架會(huì)溶解。對(duì)于嚴(yán)重污染的反相柱,,只能采用再生的方法,。
2.液相色譜柱柱頭空隙的處理
拆下不銹鋼燒結(jié)過濾器后,檢查柱床,,??梢娭^塌陷,此時(shí)先剔掉無規(guī)則床層和帶色填料,,使柱床呈白色并*水平,,再使甲醇作糊狀填料勻漿液,將填料勻漿液滴在柱上靠重力從勻漿液中排出甲醇液,,重復(fù)數(shù)次,,直到水平,完成了柱的再生,。此時(shí),,如果柱頭孔隙深度小于1cm,可以采用下述局部重裝的辦法,,否則,,柱應(yīng)當(dāng)*重裝或更換。
柱入口局部重裝時(shí)采用的填料可以和原填料一樣,,也可以用玻璃珠,。粒徑大于20um的可用敲打充填法干裝。如果粒徑小于20um則要用合適的溶劑配成勻漿,,勻漿逐次加入,,每次加入前都要使上一次加入的全部沉降。把孔隙填滿后,,用刮刀將填料刮平,,更換柱入口接頭,把柱重新接到液相儀器上,,慢慢地增加流動(dòng)相流速和系統(tǒng)壓力,,直到操作上限為止。讓相當(dāng)于10-20 倍柱體積的流動(dòng)相通過柱子,,然后逐漸降低流速,,并使壓力降為零,再把柱子卸下來,,并卸下入口接頭,,觀察柱的入口。此時(shí)孔隙應(yīng)當(dāng)減小,,但是由于新加入的填料在系統(tǒng)的操作壓力下壓入柱頭,,孔隙不可能一次就被全部充滿,。重復(fù)上述重裝過程,直到柱上加不進(jìn)更多的填料為止,。一旦柱子填充完畢,,可加進(jìn)混合樣品,測(cè)定柱子的性能是否已經(jīng)改善,。
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