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人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株Mcf-7/ADR說明書

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1) 收到細胞后,，請檢查是否漏液 ，如果漏液,，請拍照片發(fā)給我們,。

 2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h,。

 3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，添加 6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

 4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代,，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基,。

 

人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株Mcf-7/ADR說明書

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度,。

 2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。      
   
     1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。  
   
     3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

 3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；

    1. 細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,，細胞變圓 脫 落后,，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,，注意凍 存管做好標識。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，2 個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 2. 仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息,，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所 需細胞因子 等，確保細胞培養(yǎng)條件*,。若由于培養(yǎng)條件不*而導致細胞出現(xiàn)問 題,，責任由客戶自行承擔。

 3.   用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察,。此時多數(shù)細胞均 會貼壁,，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常,， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng),；如果染色結果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯(lián)系,，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次,。

 4.   靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng),，待細 胞匯 合度  80%左右時正常傳代。

 5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng),。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件,。

6.該細胞僅供科研使用,。