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人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,；A549 ,，*
細(xì)胞介紹
該細(xì)胞系由D.J.Griad通過肺癌組織移植培養(yǎng)建系，患者為58歲白人男性,。A549能通過胞苷二磷酸膽堿途徑合成含有高含量不飽和脂肪酸的卵磷脂,。
 
細(xì)胞特性

1. 來源：肺癌
2. 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3. 含量：>1x10⁶ 個(gè)/mL
4. 污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5. 規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

 
運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細(xì)胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。
 
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
                      
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞,；A549 ,，*培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1. 準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基（DMEM,GIBCO,貨號(hào)12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)
2. 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存,。
   • 細(xì)胞處理：
4. 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
5. 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
6.  

1.      棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2.      加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.      按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.      將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
 
注意事項(xiàng)：
1. 收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。