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支原體常用培養(yǎng)基為PPLO，很多公司都有出售,。但血清（常用馬血清或豬血清）和抗生素(醋酸跎)需要自己添加,。
在液體培養(yǎng)基中通常要加入酚紅做指示劑的，當(dāng)培養(yǎng)基由紅色變?yōu)辄S色時,，即可判定支原體的生長程度,。需要注意的是，支原體的分離可能不太容易,，需要多盲傳幾代,。液體培養(yǎng)基變黃后，在固體培養(yǎng)基上單克隆,，以純化分離的支原體,。
一、支原體的培養(yǎng)條件
支原體的培養(yǎng)37°C即可,。初次分離培養(yǎng)時,，在37°C，5-10% CO2條件下效果更好,。
二,、支原體的鑒定
主要靠菌落染色、生化反應(yīng)及特異性生長抑制試驗等,。
（1）Dienes菌落染色
Dienes染色液：
美藍：2.5g
天青-II：1.5g
麥芽糖：10g
碳酸鈉：0.5g
蒸餾水：100ml
染色時,，直接吸染色液覆蓋菌落，1min后，用生理鹽水洗去染色液,，低倍鏡下可見支原體菌落呈藍色,，而其他菌菌落不著色。
（2）生化反應(yīng)
根據(jù)不同采樣部位及對底物的分解或者作為能源,，可以鑒別不同支原體,。
解脲支原體分解尿素不分解精氨酸，生成NH3使培養(yǎng)基的ph升高,，酚紅指示劑變紅。
人型支原體分解L－精氨酸不分解尿素,，生成NH3使PH值升高,，酚紅指示劑變紅。
肺炎支原體分解葡萄糖,，使pH降低,，酚紅指示劑由紅變黃。
（3）在含0.002%美藍的培養(yǎng)基中肺炎支原體能生長且將美藍還原而退色,，其他口腔,、唾液或發(fā)酵支原體均被抑制生長，此法可鑒定肺炎支原體,。
三,、常用的支原體培養(yǎng)基配方
（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基
Hayflick培養(yǎng)基（PPLO培養(yǎng)基），牛心粉50g,，蛋白胨10g,，氯化鈉5g，加14g瓊脂粉為固體培養(yǎng)基,。
（2） 肺炎支原體培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml
牛血清 （滅活） 20ml
25%的酵母浸液 10ml
50%葡萄糖 1－2ml 0.4
酚紅 0.5ml
制霉素 0.001g
青霉素 10萬IU
pH 7.8
（3）人型支原體培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml
馬血清 20ml 25％的酵母浸液 10ml
30% L－精氨酸 0.33ml
0.4%酚紅 0.5ml
制霉素 0.001g
青霉素 10萬IU
pH 6.3
（4）解脲支原體培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基 70ml
馬血清 20ml
25%的酵母浸液 10ml
30%尿素0.33ml
0.4%酚紅 0.5ml
制霉素 0.001g
青霉素 10萬IU
pH 6.0
注：支原體能在人工培養(yǎng)基上生長,，但是營養(yǎng)要求較高，需要提供膽固醇和酵母才能生長,。以上配方中,，馬（牛）血清提供膽固醇，酵母浸液提供酵母,。
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