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細(xì)胞污染防治的一些建議
無論新人還是熟手,，細(xì)胞污染都是必須要面對的,，那對于細(xì)胞污染,，我覺得zui好的措施就是預(yù)防為主,，因為細(xì)胞一旦污染,，想救是非常困難的,，即便救活,，細(xì)胞狀態(tài)也會差很多,。所以我先來說下我是怎么預(yù)防細(xì)胞污染的,。
生物安全柜是處理細(xì)胞的主要場所,，也是細(xì)胞發(fā)生污染的主要場所，所以安全柜的正確使用是預(yù)防細(xì)胞污染的di一步,。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細(xì)節(jié)有哪些呢,？
首先，所有進(jìn)入安全柜的東西在進(jìn)入前都要用75%的酒精消毒,。特別要注意的是我們的手,，只要出了安全柜，再進(jìn)入安全柜前都要噴75%的酒精消毒,。實驗耗材盡量放置在合適的容器內(nèi)用報紙包好后滅菌,，如*頭插入*頭盒，其他不規(guī)則的耗材可放入鋁制飯盒內(nèi),。*頭插入*頭盒時要帶手套,，因為滅菌可能無法去除*頭上可能粘附的油脂或其他雜質(zhì),。
其次，安全柜內(nèi)的東西要擺放有序,，這個可以根據(jù)個人使用習(xí)慣而定（如果站友使用的是公用安全柜,，則可能需要使用前臨時調(diào)整），以我為例,，移液器和*頭盒（各種規(guī)格備齊）放右邊,，實驗中需要使用的試劑放右前方，廢液缸放左前方,，并保證和試劑有一定安全距離,，右角放置培養(yǎng)皿，左角放置其他耗材（如試管等）,，盡量保證常用的東西放右手邊（左撇站友相反）,，次常用的東西放左手邊（左撇站友相反），右邊操作區(qū)域為潔凈區(qū),，左邊為非潔凈區(qū)（如廢液缸和其他用剩材料）,。
再次，由于使用安全柜的過程中手和前臂都是要進(jìn)入安全柜的,，所以有條件的站友應(yīng)該準(zhǔn)備至少一件細(xì)胞房連體潔凈服（裝入布袋消毒后烘干,，在細(xì)胞房中取出，非更換前不得穿出細(xì)胞房）,，沒有條件的站友則至少準(zhǔn)備一副套袖,，每次用完后放安全柜中紫外消毒。
在準(zhǔn)備工作一切就緒后,，細(xì)胞的處理過程也是大家需要注意的,。細(xì)胞處理前應(yīng)將當(dāng)次實驗需要的各種試劑、耗材準(zhǔn)備齊備,，盡量減少細(xì)胞處理過程中的來回走動。安全柜使用前zui好紫外照射30min滅菌,，然后通風(fēng)5min保證換氣到位,。實驗過程中，所有試劑zui好不用就蓋上瓶蓋,，如果需要打開瓶蓋,，則除了干凈的*頭，其他任何東西都不要從瓶口的正上方經(jīng)過,，防止試劑污染,。細(xì)胞培養(yǎng)若使用培養(yǎng)皿，則zui好不要長時間打開皿蓋,。另外移液器也是細(xì)胞污染的一個隱藏途徑,，特別是使用無濾芯*頭的站友,，在吸取試劑時，很容易不小心將試劑倒吸入移液器,，如果發(fā)生這種情況,，要及時用酒精棉球擦去倒吸的試劑，特別是培養(yǎng)基,，極易成為細(xì)菌生長的溫床,。一把污染的移液器可以輕松污染站友的所有細(xì)胞，甚至整個實驗室的細(xì)胞,，所以友情推薦有條件的站友在處理細(xì)胞時一定要使用帶濾芯的*頭,。當(dāng)然即便是使用帶濾芯的*頭，也要盡量避免試劑倒吸,，因為想要*去除倒吸入移液器的試劑非常困難,。
培養(yǎng)箱作為細(xì)胞培養(yǎng)的場所，也需要站友留心,。由于培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度和濕度很高,，是很適宜細(xì)菌生長的，所以如果有條件（實驗室有2個或以上培養(yǎng)箱）,，zui好定期用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱,，及時定期更換培養(yǎng)箱內(nèi)水槽。
那么細(xì)胞如果還是不幸污染了,，那又該怎么辦呢,？我把細(xì)胞污染分為早期和晚期兩種。早期污染是細(xì)胞狀態(tài)變差,，但依舊能保持生長,，顯微鏡下（光鏡）不可見明顯微生物或可見少量微生物，這時候我們在換液時建議多用PBS洗幾次,，然后用雙抗原液侵潤細(xì)胞1-2min,，吸去，再加入正常培養(yǎng)基,。早期污染只要發(fā)現(xiàn)及時,，處理得當(dāng)，救回來的可能性還是很大的,。晚期污染則是細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,，細(xì)胞停止生長，顯微鏡下可見明顯微生物,。這時候我建議大家及時清理掉相關(guān)細(xì)胞,，以免污染其他細(xì)胞，重新復(fù)蘇更早批次的細(xì)胞,。所以大家會發(fā)現(xiàn),，新細(xì)胞收到后,，不應(yīng)急于開展實驗，而應(yīng)該先小心培養(yǎng),，凍存1到2個批次的早期細(xì)胞,，然后再開展實驗，這樣實驗細(xì)胞一旦出現(xiàn)問題,，可以有庫存細(xì)胞保證實驗還能繼續(xù)進(jìn)行,。