免疫印跡試驗(yàn)（Western blot）是利用抗體與抗原間的專一性結(jié)合來偵測(cè)特定蛋白質(zhì)的表現(xiàn)，為現(xiàn)代生物化學(xué),、細(xì)胞生物學(xué),、免疫遺傳學(xué)中常見的實(shí)驗(yàn)方法，也被廣泛應(yīng)用于蛋白表達(dá)水平的研究,、抗體活性檢測(cè)和早期疾病診斷等多個(gè)方面,。

免疫印跡試驗(yàn)的技術(shù)是結(jié)合蛋白質(zhì)膠體電泳 (gel electrophoresis)的高度解析力、抗體的專一性以及酵素的敏感性,，使得科學(xué)家們得以在復(fù)合物中大海撈針般的尋找蛋白質(zhì)的存在,。一開始以電泳將蛋白質(zhì)進(jìn)行大小排列與分離，再利用電場(chǎng)將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印到膜上,，接著,，擁有抗原表位的蛋白質(zhì)分子就可被抗體（一抗）特異性識(shí)別并與之結(jié)合。在此基礎(chǔ)上,，酶或熒光標(biāo)記的二抗再進(jìn)一步識(shí)別并結(jié)合一抗,，通過與底物反應(yīng)顯色來觀察目標(biāo)蛋白的表現(xiàn)。

Western blot若利用酵素反應(yīng)呈色,，由于受質(zhì)的不同,，顯色的方法可區(qū)分為：

一、化學(xué)冷光法： Chemiluminescent-based signal detection,。

二,、直接呈色法：Colormetirc/Chromogen-based signal detection。

三,、熒光呈色法：Fluorescent substrate-based signal detection。

發(fā)表文獻(xiàn)上,，又以化學(xué)冷光法為最常使用及最-方-便的呈色方法

化學(xué)冷光法(Chemiluminescent-based signal detection)的原理是利用二抗接上辣根過氧化物酶(HRP),，在H2O2存在時(shí)，HRP會(huì)氧化化學(xué)發(fā)光物質(zhì)魯米諾（lumino,，氨基苯二酰一肼）而發(fā)出冷光,，加上化學(xué)增強(qiáng)劑的作用，冷光強(qiáng)度可以增大1,000倍以上,?；瘜W(xué)冷光法操作簡便，只需將兩種顯色底物等體積混合,，再將轉(zhuǎn)印后的膜覆蓋在上進(jìn)行呈色反應(yīng),，后續(xù)訊號(hào)偵測(cè)可藉由底片感光,、顯影、定影等沖洗步驟,，或是自動(dòng)化光學(xué)檢測(cè)儀器來得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

GeneTex 開發(fā)的Trident HRP substrate (化學(xué)發(fā)光底物)系列產(chǎn)品，原本僅供公司內(nèi)實(shí)驗(yàn)室使用,，因客戶詢問度高,，且經(jīng)過上萬筆實(shí)驗(yàn)測(cè)試，2016年正式將其產(chǎn)品化,，提供給客戶使用,。

GeneTex Trident HRP substrate系列產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

1.靈敏度高：

優(yōu)于市面產(chǎn)品(見圖), 最高可檢測(cè)到飛克 (femtogram ;10-15 g)級(jí)的蛋白

2.穩(wěn)定性強(qiáng)：

A、B試劑單獨(dú)存放28℃, 避光條件下可保存12個(gè)月

3.節(jié)約時(shí)間：

不需做條件優(yōu)化, 入門新生立即可輕松上手

4.節(jié)省樣品: 

對(duì)于樣品珍貴或是表達(dá)量少的蛋白, 僅需少量蛋白即可偵測(cè)

5. 背景值低:雜訊少, 訊號(hào)強(qiáng)

圖二：化學(xué)發(fā)光底物飛克級(jí)蛋白測(cè)試

圖三：化學(xué)發(fā)光底物皮克級(jí)蛋白測(cè)試

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