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康為世紀 快速DNA無縫克隆預混試劑
參考價 | 面議 |
- 型號 CW3034M
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質 生產商
- 所在地 上海市
更新時間:2023-07-26 13:49:18瀏覽次數:1954
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供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè) |
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產品貨號:CW3034M
英文名稱:One Step Seamless Cloning Mix
產品規(guī)格:50 rxns
產品介紹:
DNA無縫克隆技術是一項簡單,、高效,、快速將插入片段定向克隆至任意載體的任意位點的方法,,本產品不依賴于T4連接酶,,不受載體和目的片段酶切位點的限制,,而直接使用同源重組的方法,,采用特殊的酶將任意方法線性化后的載體與線性化載體兩端具有20-25 bp重疊區(qū)域的PCR片段定向重組,,50℃反應5-15分鐘即可快速實現1-5個片段的定向無縫隆,。
產品名稱:康為世紀 快速DNA無縫克隆預混試劑
產品貨號:CW3034M
產品相關原理:
產品組分:
額外試劑需求:
1.插入片段,,特異引物,線性化載體
2.高保真PCR試劑
3.感受態(tài)細胞
4.膠回收試劑盒
5.PCR儀,,PCR反應管等,。
使用前準備:
插入片段的制備與回收
插入片段的制備可用任意PCR酶擴增,克隆過程不受擴增產物平末端或粘末端(A尾)的影響(重組過程中將被去除,,在最終克隆產物中不會出現),,但為了減少擴增突變,特別是點突變實驗中,,建議使用高保真聚合酶(CW2965 Super Pfx Master Mix)進行擴增,。
一般情況下,PCR產物推薦膠回收純化以降低背景比例,,如果插入片段來源于質粒模板,,且該質粒與重組載體具有相同抗性,需用內切酶Dpn I消化PCR產物,,以降低背景,,提高陽性率。
相關使用說明:
1.重組產物轉化
克隆感受態(tài)置于冰上解凍,,取10ul反應產物加入100 ul感受態(tài)細胞中,,輕彈管壁混勻,冰上靜置30分鐘,。
42℃水浴熱激90秒,,立即置于冰上2-3分鐘。
加入600 ul無抗LB液體培養(yǎng)基,,37℃搖床220 rpm培養(yǎng)30分鐘,。
5000 rpm離心5分鐘,棄多余培養(yǎng)液,,剩余100 ul菌液重懸菌體,,用無菌涂布棒
均勻涂布在正確抗性的平板上。
37℃培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)12-16小時,。
2.陽性克隆的鑒定
可根據具體情況,,選擇菌落PCR鑒定、提取質粒進行限制性內切酶鑒定或測序鑒定,。
保存條件:-20℃,,保質期一年。
產品訂購信息:
品牌 貨號 名稱 規(guī)格
康為世紀 CW2020M HiFiScript gDNA Removal RT MasterMix 100 rxns
產品名稱:康為世紀 快速DNA無縫克隆預混試劑
產品貨號:CW3034M
關于公司:
康為世紀是主要從事高附加值,、高技術含量的生物試劑的研發(fā)與生產,,為生命科學研究、基因檢測和體外診斷用戶提供創(chuàng)新型生物產品和服務??禐槭兰o建立了專業(yè)化,、集約化、能夠形成自主知識產權的技術創(chuàng)新體系和開放式的合作創(chuàng)新平臺,,構建成了公司完整的研發(fā)創(chuàng)新體系,。
紅榮微再——助力分子診斷新未來
紅榮微再作為RNA、NGS,、ctDNA,、qPCR的分子診斷專業(yè)供應商,以“傳遞科學價值,,服務科學研究"為宗旨,努力為客戶提供質量可靠,、貨美價優(yōu)的分子診斷試劑耗材,與客戶攜手為中國分子診斷的發(fā)展而前行,。
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