產(chǎn)品介紹：

　DNA無(wú)縫克隆技術(shù)是一項(xiàng)簡(jiǎn)單,、高效,、快速將插入片段定向克隆至任意載體的任意位點(diǎn)的方法,，本產(chǎn)品不依賴(lài)于T4連接酶，不受載體和目的片段酶切位點(diǎn)的限制，而直接使用同源重組的方法，采用特殊的酶將任意方法線性化后的載體與線性化載體兩端具有20-25 bp重疊區(qū)域的PCR片段定向重組,，50℃反應(yīng)5-15分鐘即可快速實(shí)現(xiàn)1-5個(gè)片段的定向無(wú)縫隆,。

產(chǎn)品名稱(chēng)：康為世紀(jì) 快速DNA無(wú)縫克隆預(yù)混試劑

產(chǎn)品貨號(hào)：CW3034M

產(chǎn)品相關(guān)原理：

產(chǎn)品組分：

額外試劑需求：

1.插入片段,，特異引物，線性化載體

2.高保真PCR試劑

3.感受態(tài)細(xì)胞

4.膠回收試劑盒

5.PCR儀,，PCR反應(yīng)管等,。

使用前準(zhǔn)備:

插入片段的制備與回收

插入片段的制備可用任意PCR酶擴(kuò)增，克隆過(guò)程不受擴(kuò)增產(chǎn)物平末端或粘末端（A尾）的影響（重組過(guò)程中將被去除,，在最終克隆產(chǎn)物中不會(huì)出現(xiàn)）,，但為了減少擴(kuò)增突變，特別是點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)中,，建議使用高保真聚合酶（CW2965 Super Pfx Master Mix）進(jìn)行擴(kuò)增,。

一般情況下，PCR產(chǎn)物推薦膠回收純化以降低背景比例,，如果插入片段來(lái)源于質(zhì)粒模板,，且該質(zhì)粒與重組載體具有相同抗性，需用內(nèi)切酶Dpn I消化PCR產(chǎn)物,，以降低背景,，提高陽(yáng)性率。

相關(guān)使用說(shuō)明：

1.重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化

克隆感受態(tài)置于冰上解凍,，取10ul反應(yīng)產(chǎn)物加入100 ul感受態(tài)細(xì)胞中,，輕彈管壁混勻，冰上靜置30分鐘,。

42℃水浴熱激90秒,，立即置于冰上2-3分鐘。

加入600 ul無(wú)抗LB液體培養(yǎng)基,，37℃搖床220 rpm培養(yǎng)30分鐘,。

5000 rpm離心5分鐘,，棄多余培養(yǎng)液，剩余100 ul菌液重懸菌體,，用無(wú)菌涂布棒

均勻涂布在正確抗性的平板上,。

37℃培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)12-16小時(shí)。

2.陽(yáng)性克隆的鑒定

可根據(jù)具體情況,，選擇菌落PCR鑒定,、提取質(zhì)粒進(jìn)行限制性內(nèi)切酶鑒定或測(cè)序鑒定。

保存條件：-20℃,，保質(zhì)期一年,。

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

品牌             貨號(hào)                   名稱(chēng)                                                     規(guī)格

康為世紀(jì)  CW2020M  HiFiScript gDNA Removal RT MasterMix   100 rxns

產(chǎn)品名稱(chēng)：康為世紀(jì) 快速DNA無(wú)縫克隆預(yù)混試劑

產(chǎn)品貨號(hào)：CW3034M

關(guān)于公司：

康為世紀(jì)是主要從事高附加值、高技術(shù)含量的生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn),，為生命科學(xué)研究,、基因檢測(cè)和體外診斷用戶提供創(chuàng)新型生物產(chǎn)品和服務(wù)?？禐槭兰o(jì)建立了專(zhuān)業(yè)化,、集約化、能夠形成自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的技術(shù)創(chuàng)新體系和開(kāi)放式的合作創(chuàng)新平臺(tái),，構(gòu)建成了公司完整的研發(fā)創(chuàng)新體系,。

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