產(chǎn)品介紹：

　DNA無縫克隆技術(shù)是一項(xiàng)簡單、高效,、快速將插入片段定向克隆至任意載體的任意位點(diǎn)的方法,，本產(chǎn)品不依賴于T4連接酶,，不受載體和目的片段酶切位點(diǎn)的限制,，而直接使用同源重組的方法，采用特殊的酶將任意方法線性化后的載體與線性化載體兩端具有20-25 bp重疊區(qū)域的PCR片段定向重組,，50℃反應(yīng)5-15分鐘即可快速實(shí)現(xiàn)1-5個片段的定向無縫隆,。

產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) 快速DNA無縫克隆預(yù)混試劑

產(chǎn)品貨號：CW3034M

產(chǎn)品相關(guān)原理：

產(chǎn)品組分：

額外試劑需求：

1.插入片段，特異引物,，線性化載體

2.高保真PCR試劑

3.感受態(tài)細(xì)胞

4.膠回收試劑盒

5.PCR儀，PCR反應(yīng)管等,。

使用前準(zhǔn)備:

插入片段的制備與回收

插入片段的制備可用任意PCR酶擴(kuò)增,，克隆過程不受擴(kuò)增產(chǎn)物平末端或粘末端（A尾）的影響（重組過程中將被去除，在最終克隆產(chǎn)物中不會出現(xiàn)）,，但為了減少擴(kuò)增突變,，特別是點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)中,，建議使用高保真聚合酶（CW2965 Super Pfx Master Mix）進(jìn)行擴(kuò)增。

一般情況下,，PCR產(chǎn)物推薦膠回收純化以降低背景比例,，如果插入片段來源于質(zhì)粒模板，且該質(zhì)粒與重組載體具有相同抗性,，需用內(nèi)切酶Dpn I消化PCR產(chǎn)物,，以降低背景，提高陽性率,。

相關(guān)使用說明：

1.重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化

克隆感受態(tài)置于冰上解凍,，取10ul反應(yīng)產(chǎn)物加入100 ul感受態(tài)細(xì)胞中，輕彈管壁混勻,，冰上靜置30分鐘,。

42℃水浴熱激90秒，立即置于冰上2-3分鐘,。

加入600 ul無抗LB液體培養(yǎng)基,，37℃搖床220 rpm培養(yǎng)30分鐘。

5000 rpm離心5分鐘,，棄多余培養(yǎng)液,，剩余100 ul菌液重懸菌體，用無菌涂布棒

均勻涂布在正確抗性的平板上,。

37℃培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)12-16小時,。

2.陽性克隆的鑒定

可根據(jù)具體情況，選擇菌落PCR鑒定,、提取質(zhì)粒進(jìn)行限制性內(nèi)切酶鑒定或測序鑒定,。

保存條件：-20℃，保質(zhì)期一年,。

產(chǎn)品訂購信息：

品牌             貨號                   名稱                                                     規(guī)格

康為世紀(jì)  CW2020M  HiFiScript gDNA Removal RT MasterMix   100 rxns

產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) 快速DNA無縫克隆預(yù)混試劑

產(chǎn)品貨號：CW3034M

關(guān)于公司：

康為世紀(jì)是主要從事高附加值,、高技術(shù)含量的生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn)，為生命科學(xué)研究,、基因檢測和體外診斷用戶提供創(chuàng)新型生物產(chǎn)品和服務(wù),。康為世紀(jì)建立了專業(yè)化,、集約化,、能夠形成自主知識產(chǎn)權(quán)的技術(shù)創(chuàng)新體系和開放式的合作創(chuàng)新平臺，構(gòu)建成了公司完整的研發(fā)創(chuàng)新體系,。

紅榮微再——助力分子診斷新未來

紅榮微再作為RNA,、NGS、ctDNA,、qPCR的分子診斷專業(yè)供應(yīng)商,，以“傳遞科學(xué)價值,，服務(wù)科學(xué)研究"為宗旨,努力為客戶提供質(zhì)量可靠、貨美價優(yōu)的分子診斷試劑耗材,，與客戶攜手為中國分子診斷的發(fā)展而前行,。