產(chǎn)品簡介：

　內(nèi)毒素是質(zhì)粒提取中常見的污染物,，由于真核細(xì)胞對內(nèi)毒素非常敏感,，因此,，如果質(zhì)粒中含有內(nèi)毒素會大大降低真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率,。本試劑盒提供一種簡單,、快捷,、高效提取無內(nèi)毒素質(zhì)粒的新方法,，提取的質(zhì)粒最大限度去除內(nèi)毒素,，并能有效去除基因組DNA、RNA,、蛋白等污染,。

　　本試劑盒適合提取5-15ml菌液，在堿裂解法裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上通過新型硅基質(zhì)膜高效專一的結(jié)合質(zhì)粒DNA,，每個吸附柱最高可吸附100 μg的質(zhì)粒DNA,，同時采用特殊的緩沖液系統(tǒng)和除內(nèi)毒素過濾柱，有效去除內(nèi)毒素,、蛋白等雜質(zhì),。由本試劑盒所得質(zhì)粒純度高、質(zhì)量穩(wěn)定,，特別適用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染,，同時也可用于DNA測序,，PCR，基于PCR的突變,，體外轉(zhuǎn)錄,，轉(zhuǎn)化細(xì)菌，內(nèi)切酶消化等下游實驗,。

產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) 無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA中提試劑盒

產(chǎn)品貨號：CW2105S

產(chǎn)品組分：

額外試劑需求：無水乙醇,、異丙醇。

使用注意：

1．所有組分可在干燥,、室溫（15-30℃）環(huán)境穩(wěn)定保存1年,，更長時間保存可置于2-8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可穩(wěn)定保存6個月,。

2．第一次使用前,，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻,，置于2–8℃保存,，使用前需在室溫中放置一段時間，恢復(fù)至室溫后使用,。

3．第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇,。

4．使用前請先檢查Buffer P2 和Buffer E3是否出現(xiàn)結(jié)晶或沉淀，如有結(jié)晶或沉淀現(xiàn)象,，可在37℃水浴幾分鐘,，即可恢復(fù)澄清。

5．注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer E3,，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子,。

6．提取質(zhì)粒的量和純度與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、菌株種類,、質(zhì)粒大小,、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān),。

相關(guān)知識：

細(xì)菌的收獲可通過離心來進行,， 而細(xì)菌的裂解則可以采用多種方法中的任意一種， 這些方法包括用非離子型或離子型去污劑,、 有機溶劑或堿進行處理及用加熱處理等,。 選擇哪一種方法取決于３個因素：質(zhì)粒的大小、小腸桿菌菌株及裂解后用于純化質(zhì)粒 DNA 的技術(shù),。

1)大質(zhì)粒 (大于 15kb) 容易受損,， 故應(yīng)采用漫和裂解法從細(xì)胞中釋放出來。 將細(xì)菌懸于蔗糖等滲溶液中，然后用溶菌酶和 EDTA 進生處理,，破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞外膜,，再加入 SDS 一類去污劑溶解球形體,。 這種方法最大限度地減小了從具有正壓的細(xì)菌部把質(zhì)粒釋放出來所需要的作用力。

2)可用更劇烈的方法來分離小質(zhì)粒,。在加入 EDTA 后,，有時還在加入溶菌酶后讓細(xì)菌

暴露于去污劑， 通過煮沸或堿處理使之裂解,。 這些處理可破壞堿基配對,， 故可使宿主的線狀染色體 DNA 變性，但閉環(huán)質(zhì)粒 DNA 鏈由于處于拓?fù)淅p繞狀態(tài)而不能彼此分開,。當(dāng)條件恢復(fù)正常時，質(zhì)粒 DNA 鏈迅速得到準(zhǔn)確配置，重新形成*天然的超螺旋分子,。

3)一些大腸桿菌菌株 (如 HB101 的一些變種衍生株 ) 用去污劑或加熱裂解時可釋放相對大量的糖類,， 當(dāng)隨后用氯化銫－溴化乙錠梯度平衡離心進行質(zhì)粒純化時它們會惹出麻煩。 糖類會在梯度中緊靠超螺旋質(zhì)粒 DNA 所占位置形成一致密的,、模糊的區(qū)帶,。因此很難避免質(zhì)粒 DNA 內(nèi)污染有糖類，而糖類可抑制多種限制酶的活性,。 故從諸 如 HB101 和 TG1 等大腸桿菌蓖株中大量制備質(zhì)粒時,，不宜使用煮沸法。

4)當(dāng)從表達(dá)內(nèi)切核酸酶 A 的大腸桿菌菌株 (endA+ 株,，如 HB101) 中小量制備質(zhì)粒時,，建議不使用煮沸法。 因為煮沸不能*滅活內(nèi)切核酸酶 A,，以后在溫育 (如用限制酶消化 )時,，質(zhì)粒 DNA 會被降解。但如果通過一個附加步驟 (用酚：氯仿進行抽提 )可以避免此問題,。

儲存與運輸

室溫 (15-30℃)

產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) 無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNA中提試劑盒

產(chǎn)品貨號：CW2105S

產(chǎn)品訂購信息  

品牌               貨號                         名稱               規(guī)格

康為世紀(jì)    CW2105S     無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒  50 preps

關(guān)于公司：

康為世紀(jì)生物科技股份有限公司是一家立足于生命科學(xué)領(lǐng)域,，有自主知識產(chǎn)權(quán)的國家優(yōu)良企業(yè)，主要從事高附加值,、高技術(shù)含量的生物試劑的研發(fā)與生產(chǎn),，為生命科學(xué)研究、基因檢測和體外診斷用戶提供創(chuàng)新型生物產(chǎn)品和服務(wù),。產(chǎn)品線主要包括分子診斷原料酶,、核酸采集與保護劑、核酸提取、分子診斷檢測試劑等,，打破了中國生物研究與產(chǎn)業(yè)對進口試劑的依賴,。

紅榮微再——助理分子診斷新未來

紅榮微再作為RNA、NGS,、ctDNA,、qPCR的分子診斷專業(yè)供應(yīng)商，以“傳遞科學(xué)價值,，服務(wù)科學(xué)研究"為宗旨,努力為客戶提供質(zhì)量可靠,、貨美價優(yōu)的分子診斷試劑耗材，與客戶攜手為中國分子診斷的發(fā)展而前行,。