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二手測(cè)序儀技術(shù)使用指導(dǎo)工作
閱讀：510 發(fā)布時(shí)間：2017-9-20
二手測(cè)序儀分手工測(cè)序和自動(dòng)測(cè)序,，手工測(cè)序包括sanger雙脫氧鏈終止法和maxam-gilbert化學(xué)降解法,。自動(dòng)化測(cè)序?qū)嶋H上已成為當(dāng)今 dna序列分析的主流,。
二手測(cè)序儀注意事項(xiàng)
1．a(chǎn)bi prism 310基因分析儀是精密儀器,，需專人操作,、管理和維護(hù),。
2．本實(shí)驗(yàn)測(cè)序pcr反應(yīng)的總體積是5μl,，而且未加礦物油覆蓋，所以pcr管蓋的密封性很重要,，除加完試劑后蓋緊pcr管蓋外,，選用pe公司的pcr管,。如pcr結(jié)束后pcr液小于4～4.5μl,，則此pcr反應(yīng)可能失敗，不必進(jìn)行純化和上樣,。
3．作為測(cè)序用戶來(lái)說(shuō),，只需提供純化好的dna樣品和引物，一個(gè)測(cè)序pcr反應(yīng)使用的模板不同,，需要的dna量也就不同,，pcr測(cè)序所需模板的量較少，一般pcr產(chǎn)物需30～90ng,，單鏈dna需50～100ng,，雙鏈dna需200～500ng，dna的純度一般是a260nm/a280nm為 1.6～2.0,，用去離子水或三蒸水溶解dna,，不用te緩沖液溶解。引物用去離子水或三蒸水配成3.2pmol/μl較好,。
4．本實(shí)驗(yàn)使用的測(cè)序試劑盒是bigdye熒光標(biāo)記終止底物循環(huán)測(cè)序試劑盒,，一般可測(cè)dna長(zhǎng)度為650bp左右。本儀器dna測(cè)序度為 (98.5±0.5) %,，儀器不能辨讀的堿基n<2%,，所需測(cè)定的長(zhǎng)度超過(guò)了650bp，則需設(shè)計(jì)另外的引物,。二手測(cè)序儀為保證測(cè)序更為準(zhǔn)確,，可設(shè)計(jì)反向引物對(duì)同一模板進(jìn)行測(cè)序，相互印證,。對(duì)于n堿基可進(jìn)行人工核對(duì),，有時(shí)可以辨讀出來(lái)。為提高測(cè)序的度,，根據(jù)星號(hào)提示位置,，可人工分析該處彩色圖譜,，對(duì)該處堿基作進(jìn)一步核對(duì)。