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二手定量PCR儀的技術(shù)使用指標(biāo)
閱讀：477 發(fā)布時間：2017-9-20
二手定量PCR儀,，由熒光定量系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)組成,，用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光,。與實(shí)時設(shè)備相連的計(jì)算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù),。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實(shí)時分析軟件以圖表的形式顯示,。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強(qiáng)度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析,。二手定量PCR儀的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行正常化處理來彌補(bǔ)背景熒光的差異,。正?；罂梢栽O(shè)定域值水平，這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平,。
實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計(jì)算,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果,。因此，實(shí)時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期）,，此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性*,，即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增,，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,，因此，二手定量PCR儀是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法,。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的,、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的二手定量PCR儀是迄今為止定量zui準(zhǔn)確,，重現(xiàn)性的定量方法,，已得到*的*，二手定量PCR儀廣泛用于基因表達(dá)研究,、轉(zhuǎn)基因研究,，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域,。