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主營產(chǎn)品： 超微量分光光度計(jì),核酸蛋白檢測儀,超微量紫外分光光度計(jì),nano光度計(jì),超微量核酸蛋白檢測儀 |
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2022-6-24 閱讀(3590)
那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下淺談層析實(shí)驗(yàn)中的氣泡問題（三）：
說到氣泡，你可能會聯(lián)想到酣暢淋漓的可樂，通透上頭的啤酒,，亦或是流光飛舞的浪漫,，生活中的氣泡,，似乎還帶有那么一絲美好,，然而對于實(shí)驗(yàn)來說，尤其是在大多不會配置在線脫氣單元的FPLC系統(tǒng)上做的層析實(shí)驗(yàn),，氣泡就如煩人的蒼蠅,，鞋里的石子，令人如鯁在喉不吐不快,，如若是重要樣品,、昂貴填料，氣泡帶來的實(shí)驗(yàn)失敗那簡直是小型災(zāi)難現(xiàn)場,。那么氣泡是源自何來,，而又去之何處，怎么能讓它們從我們的系統(tǒng)里消失,，以下此篇,，做一個小小探討，拋磚引玉,，共謀對策而滅之,。
實(shí)際案例
Fig.1 氣泡造成的UV雜峰
Fig.2 氣泡造成的系統(tǒng)壓力波動
這些癥狀基本能覆蓋大部分的層析實(shí)驗(yàn)問題,，可見氣泡的破壞力和惱人程度,，知己知彼方才能有的放矢，那么氣泡是如何形成的呢,？流動相中氣體形成的原因有多種,，*根本的還是由于氣體在液體中達(dá)到過飽和狀態(tài)；平衡狀態(tài)時溶解空氣的量與溶液的性質(zhì),、氣體的種類有關(guān),，也與外界條件有關(guān), 主要的外界條件有以下 3 種。
溶
劑
混
合
● 在層析實(shí)驗(yàn)中，有很多溶液混合的操作,，如置換緩沖,，洗脫等等，所以一些溶液的混合需要盡量避免,，比如乙醇溶液和鹽溶液,，需要用純水隔開，否則易造成氣泡析出,，所以當(dāng)乙醇溶液保存的系統(tǒng)需要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時,，緩沖液是鹽溶液如PBS，我們就需要用純水先做系統(tǒng)沖洗,，再做PBS的填充,。
Fig.4 緩沖液中析出的氣泡
●如果實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，不可避免的需要兩種不同極性溶劑的混合,，還要避免氣泡,，則需要 從混合處想辦法，一般的層析系統(tǒng)兩相溶劑的混合是在有攪拌裝置的動態(tài)混合池中進(jìn)行,，混合劇烈,，容易析出氣泡，此時可以考慮將動態(tài)混合器改為靜態(tài)混合器,，讓溶劑的混合方式由劇烈變?yōu)闇睾?，會有較好的避免氣泡的效果。
Fig.5 動態(tài)混合器和靜態(tài)混合器
另外,，除了溶液帶入,，系統(tǒng)中的漏點(diǎn)也會引入氣泡，尤其是未加壓的低壓流路,，在管路接頭,、閥和轉(zhuǎn)子等分離結(jié)構(gòu)位置，容易產(chǎn)生漏點(diǎn),，系統(tǒng)中如果發(fā)現(xiàn)有氣泡造成基線波動,，而在溶液進(jìn)口又沒發(fā)現(xiàn)可見的氣泡，則需要在系統(tǒng)內(nèi)查找漏點(diǎn),，有效的辦法是用透明的ETFE管代替不透明的Peek管,，觀察是哪一段出現(xiàn)的氣泡，以便判斷漏點(diǎn),，及時處理,。
Fig.6 管路中漏入的氣泡
關(guān)于溶劑的脫氣方法，目前常用的有兩種：超聲脫氣和負(fù)壓脫氣,；超聲脫氣就是利用超聲鍋或者超聲探頭,，當(dāng)高功率超聲波耦合到液體中時,，液體分別在高壓和低壓循環(huán)中被壓縮和膨脹，在低壓循環(huán)中,，會產(chǎn)生微小的真空氣泡（所謂的空化氣泡）,，這些氣泡會在多個壓力循環(huán)中增長。在氣泡生長的那些周期中,，液體中的溶解氣體進(jìn)入真空氣泡,，這樣真空氣泡就變成了不斷增長的氣泡。超聲脫氣特點(diǎn)是操作便捷,，效率高,，脫氣快，一般10-15分鐘的超聲可以去除溶液中大部分氣泡,，缺點(diǎn)是容易發(fā)熱,，需要降溫，注意在用超聲鍋脫氣時,，溶劑瓶蓋要擰松或者拿掉,；負(fù)壓脫氣是利用機(jī)械產(chǎn)生負(fù)壓的方式使溶液中的氣泡析出,，一般分析型色譜儀或者需要高精度檢測的儀器,，在流路中配置在線脫氣單元，都是利用負(fù)壓的原理進(jìn)行脫氣,，實(shí)驗(yàn)室常用的是真空抽濾裝置,，既能過濾溶液，又能脫氣,，實(shí)用性高,。
Fig.7 超聲脫氣
Fig.8 真空抽濾裝置
以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于淺談層析實(shí)驗(yàn)中的氣泡問題（三）,。
我們上海嘉鵬科技有限公司是專業(yè)生產(chǎn)超蛋白純化系統(tǒng),、超微量核酸蛋白測定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng),、凝膠成像分析系統(tǒng),、紫外分析儀、核酸蛋白檢測儀,、紫外檢測儀,、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器,、恒流泵,、自動部分收集器等為核心的十幾個產(chǎn)品系列的廠家，歡迎大家前來訂購
