酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下,，檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。光通過被檢測(cè)物,，前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量,，特定波長(zhǎng)下，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系,。檢測(cè)單位用 OD 值表示,，OD 是 optical delnsity（光密度）的縮寫，OD＝1og（1/trans）,，其中 trans 為檢測(cè)物的透光值,。根據(jù)蘭伯—比爾定律，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：E＝OD=logΙ0/Ι,，其中：E 表示被吸收的光密度,；Ι0 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度；Ι 為從被檢測(cè)物出來的光強(qiáng)度,。OD 值由下述公式計(jì)算：E＝OD=C×D×E 其中：C 為檢測(cè)物的濃度,；D 為檢測(cè)物的厚度；E 為摩爾因子,。

酶標(biāo)儀：即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（ELISA Reader）是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器,。可簡(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)兩大類,，但其工作原理基本上都是一致的,，其核心都是一個(gè)比色計(jì)，即用比色法來分析抗原或抗體的含量,。ELISA 測(cè)定一般要求測(cè)試液的終體積在250ul 以下,，用一般光電比色計(jì)無法完成測(cè)試。因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求,。

ELISA 實(shí)驗(yàn)原理：用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體,，往包被抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或者標(biāo)準(zhǔn)品,、生物素化的抗體，HRP 標(biāo)記的親和素,，經(jīng)過*洗滌后用底物顯色,。底物在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)蛋白呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在（450nm）波長(zhǎng)下測(cè)定測(cè)定吸光度,，計(jì)算樣品濃度。

1.1 酶標(biāo)儀測(cè)糧食中的黃曲霉毒素含量?jī)x器,、試劑①美國(guó)熱電 MK3 型酶標(biāo)儀,；賽多利斯電子天平（感量 0.1 克）；50 微升移液器及配套吸頭,；恒溫培養(yǎng)箱（0℃-50℃）,；冰箱（4℃-8℃）；玻璃器皿：錐形瓶,，燒杯,，分液漏斗，蒸發(fā)皿,，量筒,，具塞試管，滴管,，移液管,；濾紙等。②黃曲霉毒素 Bl 酶聯(lián)免疫定量測(cè)試盒,；石油醚,；甲醇；蒸餾水,。

1.2實(shí)驗(yàn)步驟

1.2.1樣品處理方法：稱5.0g樣品（已粉碎）于100ml具塞三角瓶中,。準(zhǔn)確加入 25.0ml 甲醇水（1+1）溶液，加塞振搖 15min,，棄去 1/4初濾液,，收集試樣濾液，此液為樣品提取液,。假設(shè)樣品不需稀釋,，此液則為待測(cè)樣液。

1.2.2試劑的配制①每瓶C試劑（酶標(biāo)抗原）中準(zhǔn)確加入1.5mlD試劑(酶標(biāo)抗原稀釋液),，充分溶解,，配成實(shí)驗(yàn)用酶標(biāo)抗原溶液，2℃——8℃保存,。②取適量 E 試劑（濃縮洗滌液）用蒸餾水稀釋 20 倍待用,。

1.2.3操作流程：樣品提取，適當(dāng)稀釋,，試劑準(zhǔn)備,，加樣，在溫度37℃下進(jìn)行免疫反應(yīng)30min，然后在37℃下進(jìn)行顯色反應(yīng)15min,，結(jié)果判定,，計(jì)算含量。

2 結(jié)果計(jì)算

建立公式：X（ng/g）=C×VM×D式中：X：黃曲霉毒素B1含量（ng/g）,；C：待測(cè)樣液中黃曲霉毒素Bl含量（ng/m1）,；V：樣品提取液體積（m1）；M：樣品質(zhì)量（g）,；D：樣品稀釋倍數(shù),。

3 酶標(biāo)儀的使用注意事項(xiàng)

3.1 工作環(huán)境 酶標(biāo)儀是一種精密的光學(xué)儀器，因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,，還能夠延長(zhǎng)其使用壽命,。

①儀器應(yīng)放置在無磁場(chǎng)和干擾電壓的位置。

②儀器應(yīng)放置在低于 40 分貝的環(huán)境下,。

③為延緩光學(xué)部件的老化,，應(yīng)避免陽光直射。

④操作時(shí)環(huán)境溫度應(yīng)在 15℃——40℃之間,，環(huán)境濕度在 15％——85％之間,。

⑤操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。

⑥操作環(huán)境空氣清潔,，避免水汽,，煙塵。保持干燥,、干凈,、水平的工作臺(tái)面，以及足夠的操作空間,。

3.2 操作注意事項(xiàng) 酶標(biāo)儀的功能是用來讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果,，因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果，試劑盒的使用必須規(guī)范,。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng)：①使用移液器加液,，移液頭不能混用。②洗板要洗干凈,。如果條件允許,，使用洗板機(jī)洗板，避免交叉污染,。③嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作,，反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確。④請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部,，操作完成后請(qǐng)洗手,。⑤如果使用的樣品或試劑具有污染性,、毒性和生物學(xué)害,，請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明,，以防對(duì)操作人員造成損害。⑥不要在測(cè)量過程中關(guān)閉電源,。⑦對(duì)于因試劑盒問題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差,，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù)，以達(dá)到佳效果,。⑧使用后蓋好防塵罩,。

3.3 閾值可疑范圍的設(shè)定 一般酶標(biāo)儀閾值矩陣設(shè)定可設(shè)定陰性、可疑,、陽性 3 個(gè)范圍,。有經(jīng)驗(yàn)表明可疑范圍的設(shè)定要設(shè)定為臨界上下15%（也稱灰色區(qū)）為宜；同時(shí)陰性范圍下限和陽性范圍應(yīng)該充分考慮到影響 ELISA 結(jié)果因素的存在,，可疑范圍上限必須考慮到雙波長(zhǎng)情況下出現(xiàn)負(fù)吸光度值和超范圍報(bào)告影響結(jié)果的可能性,。“灰色區(qū)”的結(jié)果的真實(shí)性是 ELISA 定性測(cè)定中需要把握的環(huán)節(jié)，也是實(shí)驗(yàn)室引起醫(yī)療糾紛的主要方面,，因此必須對(duì)可疑結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢,，用兩種試劑盒。

3.4 樣本名字文件設(shè)定 由于部分試驗(yàn)的所測(cè)樣本不一定是連續(xù),，樣本命名顯得尤為重要,。同時(shí)應(yīng)做到樣本名字文件與吸光度值文件保持一致，這樣若以后再調(diào)出吸光度文件時(shí),，樣本名字文件可自動(dòng)同時(shí)調(diào)出,；若大批量樣本時(shí)應(yīng)對(duì)不同微孔板編號(hào)區(qū)別（以文件后綴形式）。

3.5 樣板程序文件設(shè)定 一個(gè)實(shí)驗(yàn)室同一試驗(yàn)可能使用不同廠家試劑盒,，但不同試劑盒規(guī)定的設(shè)定對(duì)照數(shù)量,、閾值判定標(biāo)準(zhǔn)等均可能不一致，酶標(biāo)儀所設(shè)樣板程序也不一致,。為了使用方便,，可在樣板程序文件中用后綴加以區(qū)別。

3.6記錄管理 隨著我國(guó)法律的不斷完善,，人們的法制觀念不斷增強(qiáng),，建立健全原始記錄十分重要和必要。原始記錄不僅是儀器打印出來的數(shù)據(jù),，還應(yīng)記錄試劑盒廠家,、批號(hào)、效期,、質(zhì)控物來源,、批號(hào)、效期、檢測(cè)者,、復(fù)核者等相關(guān)內(nèi)容,，同時(shí)可用原始記錄進(jìn)行資料分析，更好地開展工作,。但要注意的是原始記錄不宜保存在電腦內(nèi),，應(yīng)打印后裝訂保存。