ELISA試劑盒試驗(yàn)常見問題簡析
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)的留心事項(xiàng)如下：
1,、正式實(shí)驗(yàn)時(shí),，應(yīng)別離以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照操控實(shí)驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份,，以保證實(shí)驗(yàn)成果的性,。有時(shí)本底較高，闡明有非特異性反應(yīng),，可選用羊血清,、兔血清或BSA等封閉。
2,、在ELISA中,，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很主要的，其間包括：
（1）固相載體的選擇：ELISA試劑盒很多物質(zhì)可作為固相載體,，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其方式可所以凹孔平板,、試管、珠粒等,。如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,，在運(yùn)用前均可進(jìn)行選擇：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),，查詢其顯色反應(yīng)是不是均一性,，據(jù)此判明其吸附功用是不是出色。
（2）ELISA試劑盒包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體外表時(shí),，懇求純度要好,，吸附時(shí)通常懇求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度,，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,，通常多選用4℃18～24小時(shí)。ELISA試劑盒蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度（0.1,、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它實(shí)驗(yàn)條件相一同,，查詢陽性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml,。
（3）酶符號(hào)抗體作業(yè)濃度的選擇：ELISA試劑盒首先用直接ELISA法進(jìn)行開端效價(jià)的滴定（見酶符號(hào)抗體部份）,。然后再固定其它條件或采用“方陣法”（包被物、待檢樣品的參看品及酶符號(hào)抗體別離為不一樣的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里地滴定其作業(yè)濃度,。
（4）ELISA試劑盒酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇懇求是價(jià)廉,、安全、有明顯地顯色反應(yīng),，而本身無色,。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)留心防護(hù),。有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌,、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是如今較為滿意的供氫體,。底物作用一段時(shí)間后,，應(yīng)參與強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以停止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,，以10-30分鐘為宜,。底物運(yùn)用液有必要新鮮制作，尤其是H2O2在臨用前參與,。