細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況總結(jié)

對黑膠蟲的各種猜測及相應(yīng)的處理
1. 非生物類
（1）細(xì)胞碎片類
在細(xì)胞培養(yǎng)的時候,， 由于細(xì)胞代謝、物質(zhì)交換,、周邊環(huán)境變化,，尤其是在從37度培養(yǎng)箱中拿出來觀察的過程中，由于液體培養(yǎng)基的比熱較大,，液內(nèi)溫度高于外界溫度,，造成冷熱交換、小范圍內(nèi)形成液體流動加劇,，當(dāng)然這些小歲末就會被攪動起來形成似乎"游動"的感覺,；隨著細(xì)胞培養(yǎng)的繼續(xù)，部分細(xì)胞開始衰亡,，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破裂,，破裂之后的細(xì)胞內(nèi)容物泄露到培養(yǎng)液中,。尤其是溶酶體的破壞，連續(xù)性地造成其他細(xì)胞和細(xì)胞器的損傷,，如果換液不很勤,，又會出現(xiàn)進(jìn)一步破壞和殘渣的出現(xiàn)；再者,，"黑焦蟲"問題是很多細(xì)胞培養(yǎng)者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的問題,，但到目前為止尚未找到其監(jiān)測和排除的試劑和手段，這首先是由于所謂"黑焦蟲"病原體根本難以收集和捕捉,， 這也從另一個側(cè)面證明了"黑焦蟲"問題的難以確定性,；再說任何一種外來的微生物在培養(yǎng)基中都會有生命活動的反應(yīng)和表現(xiàn)，而不是簡單地運(yùn)動那樣的外觀性表現(xiàn),。舉一個例子：如果"黑焦蟲"的運(yùn)動狀況已經(jīng)到了用顯微鏡已經(jīng)可以觀察出的程度,，其營養(yǎng)代謝和能量需求也就可想而知。這樣,，培養(yǎng)液中的影響消耗,、酸堿含量程度等都要發(fā)生明顯變化。比如說：迅速的,、大含量的沉淀,， pH值的迅速下降，細(xì)胞大量破碎死亡,、引發(fā)其它類型微生物侵染等等,。而這些狀況，在所謂的"黑焦蟲"感染中,，是很難觀察到的,。同時"黑焦蟲"的出現(xiàn)而影響細(xì)胞狀態(tài)似乎得不到有力的證據(jù)。倒是細(xì)胞狀態(tài)下降的時候,，"黑焦蟲"明顯增多了,。很有可能是細(xì)胞狀態(tài)下降時，細(xì)胞衰亡產(chǎn)生的細(xì)胞碎片,。所以黑膠蟲屬于細(xì)胞碎片是比較可能和合理的,。
（2）玻璃培養(yǎng)瓶中的類似氧化硅的東西
網(wǎng)上有一篇文章說，黑膠蟲其實(shí)不是一種生物,，是無機(jī)物,，其本質(zhì)是玻璃培養(yǎng)瓶里的硅顆粒?？捎绊懠?xì)胞生長,，細(xì)胞狀態(tài)好時，不明顯。細(xì)胞狀態(tài)較差,，數(shù)量少時才容易看到,，的辦法是用一次性培養(yǎng)瓶，可消除黑膠蟲影響,。
（3）血清聚合物產(chǎn)物
gibco公司的血清說明,，此物為血清聚合產(chǎn)物，而不是微生物,。
2. 生物類
（1）支原體
有人曾認(rèn)為黑膠可能是支原體污染,，因為相對比較的文章指出，黑膠蟲可以通過濾膜,，可以在空氣中傳播,。而恰巧口腔支原體為人體口腔中之正常菌叢，所以實(shí)驗室之操作人員的污染亦可能為支原體的污染源,。但有人為此做了實(shí)驗證明黑膠蟲不會是支原體,，原因如下：
光鏡下可見, 因為體積不對，支原體在普通顯微鏡下不能看到,。
多種染色后可見,，甚至hoechst即能將它染色,一般來說支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺,，革蘭染色為陰性,。所以，黑膠蟲是一種支原體的可能性比較小,。
（2）真菌
有很多人發(fā)現(xiàn)類似黑膠蟲的,，但zui后確定是真菌，二性霉素B對其有效,。那說明黑膠蟲不存在只是細(xì)胞培養(yǎng)中的真菌感染,，還是說明黑膠蟲污染屬于真菌類污染物。如果黑膠蟲是一種真菌,，那么由此引起的污染是不會引起那么多人的關(guān)注,，即使它很特殊。但是這不能排除那些認(rèn)為"黑膠蟲"是真菌的細(xì)胞者,，看到的只是一般真菌感染,。由于細(xì)胞被感染了，要進(jìn)行拯救處理,，不像理論上那么簡單，稍有不注意都是很容易導(dǎo)致培養(yǎng)失敗,，所以黑膠蟲是一種真菌也是不太可能,。
（3）寄生類原蟲
黑膠蟲屬于寄生類的原蟲，而不是細(xì)菌、支原體,，也不是什么補(bǔ)體,、細(xì)胞碎片或蛋白沉淀。有人在400倍以上的高倍鏡下可以清楚的看到膠蟲有兩種不同形態(tài),，一種較大,，運(yùn)動較慢，泛紅光,；另一種較小,，運(yùn)動較快，紅中帶綠,，個小的圍著個大的分布,，很可能是公的圍著雌的。這種生物也并非離開細(xì)胞就不能存活,，也有人做過這樣的試驗,，單純培養(yǎng)過污染膠蟲的血清4周，直到滿視野都是黑煤渣般的膠蟲,。給人的感覺是膠蟲和細(xì)胞一樣有叢集性,，如果膠蟲密度低則生長緩慢，如果手懶,，拖了幾天沒換液,，待膠蟲生長到一定濃度后便會飛速分生，細(xì)胞受感染的程度也大,，這時除了培養(yǎng)基中可見外,，細(xì)胞表面通常也象長滿了粉刺，所以有人認(rèn)為細(xì)胞旁分泌的某些因子可以抑制膠蟲的生長,。據(jù)說,，中國病毒所和軍科院鑒定是一種寄生于牛血清內(nèi)的一種原蟲，似乎和草履蟲和變形蟲有類似之處,，然而由于課題經(jīng)費(fèi)不夠而不能繼續(xù)進(jìn)行下去,。由此黑膠蟲屬于原蟲的有比較大的可能性。