細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）

1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,，加1ml  0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，建議邊觀察邊消化）
 
 2.鏡下觀察消化情況,，在細(xì)胞邊緣縮小,，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培養(yǎng)基,，輕輕吹打細(xì)胞層,，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散

3.取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況,，定期換液（每周2-3次）,，待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存