如何儲存濃縮蛋白質，這些技巧需牢記!

蛋白質是非常敏感的,，即使已經(jīng)提取濃縮,，在儲存時仍然會發(fā)生降解、聚合和失活,。如下分析幾種保存方法的優(yōu)缺點和一些小技巧,，在儲存時應根據(jù)自己的蛋白和實驗需求選擇適合自己的方法，權衡利弊,，以免造成實驗的麻煩,。

1. 儲存在4°C溶液

將濃縮蛋白質儲存在單一溶液（如PBS），置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中,，放在4°C冰箱保存,。

優(yōu)點：蛋白容易獲得，可以快速進行實驗,，且同一管樣品可重復取樣,，這樣避免了因經(jīng)常解凍而加速蛋白的降解,。

缺點：在重復取樣時，溫度升高且暴露于環(huán)境中,，可能會導致微生物污染,，蛋白質失活和氧化。要避免這種情況,，可以把蛋白質分成小份儲存,，并加入蛋白酶抑制劑、抗菌劑和還原劑等,。但也要根據(jù)自己蛋白的情況,，如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子內存在二硫鍵，為保證其完整性,，應該存儲在氧化環(huán)境中,。另外，儲存時間超過一個月的蛋白可以考慮扔掉,。

2. 儲存在-20°C,，加入冷凍保護劑

可以將蛋白保存在含有25-50% (w/v) 甘油或乙二醇溶液中。

優(yōu)點：在低溫下,，蛋白質對微生物污染,，蛋白酶降解和氧化反應更有抵抗力，容易保證其活性,。用甘油或乙二醇稀釋使蛋白處于溶液中,，可以方便取樣。此外,，這種方式儲存的蛋白質可以保存長達一年,，對于抗體軛合物是一個好的選擇。

缺點： 蛋白質在-20°溶液中仍有可能遭受水解,、污染和氧化,，也需加入抑制劑、還原劑等,。而且將樣品存放在50%冷凍保護劑中有時是不可取的,，取決于你接下來要做的實驗。

3. 凍存在-80°C或液氮中

將蛋白質分裝成一次使用的量,，快速冷凍,。

優(yōu)點：可以長期保存（多年)，不需要甘油,、*等化學物質,，避免蛋白質降解或微生物污染。

缺點：冷凍蛋白質應一次性使用,，為了避免反復凍融發(fā)生降解,。此外,抗體軛合物(特別是堿性磷酸酶復合物)冷凍后可能會失活,。

4. 凍干粉末

將你的蛋白質脫水凍干成粉末，在冰箱中無限期存放,。

優(yōu)點：蛋白質不會像在水溶液中發(fā)生會水解和其他形式的化學降解,，凍干蛋白質的空間也比溶液要小，而且可以長期儲存,。

缺點：凍干并不適用于所有蛋白質,，與細胞膜相關的蛋白質容易被凍干破壞,。而且,，并非所有的蛋白質都凍干后都能保持穩(wěn)定性，有的可能會變性,，從而減少它們的有用性和再溶解的能力,。此外，一些蛋白質可能需要與蔗糖,、甘露醇或BSA等才能保持穩(wěn)定,。

六個儲存小技巧：

1. 無論是冷凍還是儲存在溶液中，將蛋白進行分裝,，以避免凍融,，降低污染的風險。
2. 低濃度蛋白能更好地與塑料或玻璃結合,，將蛋白濃縮至1mg/ml以上,，,或添加BSA等減少這種結合。
3. 添加乙二醇或甘油等保護劑,，使蛋白穩(wěn)定,，防止結冰。,。
4. 抑制微生物的生長,，添加硫柳汞01%(w / v)或*0.05%(w / v)。
5. 添加EDTA ,、PMSF等蛋白酶抑制劑來減少蛋白質降解,。
6. 阻止半胱氨酸氧化，可以加入1-5mM還原劑,，例如DTT,。