細胞的復蘇(2)--注意事項

注意事項：

1.使用DMSO前,，不需要進行高壓滅菌，它本身就有滅菌的作用,。高壓滅菌反而會破華它的分子結構,，以至于降低冷凍保護效果。在常溫下,，DMSO對人體有害,，故在配制時戴上手套操作。

2.不宜將凍存細胞放置在0℃～-60℃這一溫度范圍內(nèi)過久,，低溫損傷主要發(fā)生在這一溫度區(qū)內(nèi),，是“危險溫區(qū)”,。

3.注意定期檢查液氮罐內(nèi)液氮量，及時添加,。

細胞培養(yǎng)三不要

養(yǎng)細胞是醫(yī)學研究生的基本功,。我養(yǎng)過骨髓MSC、心肌細胞,、心肌成纖維細胞,、AD293腺病毒包裝細胞、PA317逆轉錄病毒包裝細胞,。養(yǎng)得zui多的是MSC,。有三個小經(jīng)驗和大家分享一下：

1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子,，覺得這樣可以避免污染,。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎,？燒瓶口燒的,。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候,，熾熱的空氣進入瓶內(nèi),。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷,，壓力驟降,，培養(yǎng)基中的碳酸就會轉化成二氧化碳，釋放出來,。培養(yǎng)基中的碳酸少了,，當然會變堿。如果不燒瓶口的話,，你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。（當然多多少少還是會有一點越用越堿,，因為室溫還是比冰箱內(nèi)的溫度高）

其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰,。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼,。如果有細菌的話,，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌,，除非把瓶口和塞子燒紅,。我在國內(nèi)從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,，超凈臺內(nèi)根本就不點酒精燈,。

2. 不要頻繁看細胞,。對于初學者而言，養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣,，有空就要去看看,。細胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看,。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處,，特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細胞,。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的,。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境,。你跑去看細胞,，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了,。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇毎毎鲜情L不好,。老手細胞一扔好幾天不管,，細胞瘋長。

3. 不要怕消化,。在傳代的時候,，初學者往往生怕細胞消化過度，早早地終止消化,。細胞沒下來就使勁吹燈,，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,，用力吹打對細胞的損傷比消化更大,。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候，37度消化一夜,，細胞也沒事,。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來,。還有,，動作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡,。氣泡在破裂時的機械應力相當大,，對細胞的傷害也是很大的。