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本期就溫度對高效液相色譜分析的影響展開說明,，重點(diǎn)介紹柱溫和環(huán)境溫度對分析的影響。

一,、柱溫對高效液相色譜分析的影響,，通過范特霍夫方程來表達(dá)。

原則上,，范特霍夫方程是用于計(jì)算在不同溫度下某反應(yīng)平衡常數(shù)的方程：

㏑K=－△H/RT+△S/R

   K：保留因子,，描述色譜柱溫度相關(guān)系數(shù)

△H：流動(dòng)相和固定相之間分析物的焓變

△S：相應(yīng)的熵變        

   R：相位關(guān)系的常數(shù)        T：溫度

從公式中可以看出：lnk與時(shí)間1/T之間是線性關(guān)系，實(shí)際上因物質(zhì)特性,、條件差異不一定出現(xiàn)良好相似性,，在高效液相色譜檢測中柱溫的變化常常會(huì)造成某些指標(biāo)不良。

案例一：柱溫對含量,、分離度及理論塔板數(shù)的影響。

某公司測試果糖及葡萄糖含量,，分離度及理論塔板數(shù)結(jié)果異常,。

1含量結(jié)果誤差大

< 數(shù)據(jù)對比結(jié)果 >

2分離度及理論塔板數(shù)下降

< A數(shù)據(jù) >

<B數(shù)據(jù) >

3原因分析

糖樣要求溫度：85℃，糖類分析通常高溫會(huì)帶來高分離度,，但超過90℃之后幾乎沒有變化,，柱溫低于70℃對于許多糖類來說，不能提供足夠分離度,。

經(jīng)排查發(fā)現(xiàn),，柱溫箱溫度偏差較大，與實(shí)際溫度相差20度，修正柱溫后,，測試正常,。

二、環(huán)境溫度對高效液相色譜分析的影響,，歸類來說主要包含兩個(gè)方面：其一對檢測器影響,；其二對流動(dòng)相影響。

案例二：室溫對基線噪音的影響,；某公司測試過程中基線噪音異常變大,。

設(shè)置波長接近流動(dòng)相截止波長時(shí)，室溫波動(dòng)超過1℃引發(fā)噪音變大,。室溫穩(wěn)定后,，基線正常。

案例三：某公司測試過程中保留時(shí)間異常,。

室溫波動(dòng)超過3℃以上會(huì)引發(fā)壓力波動(dòng),，室溫穩(wěn)定后重新測試，保留時(shí)間正常,。

檢查室溫變化發(fā)現(xiàn),，室溫波動(dòng)范圍2-4度左右，柱壓隨室溫變化而變化,。

以上可知,，環(huán)境溫度對高效液相色譜分析的影響，主要在以下兩個(gè)方面,。

① 設(shè)置波長接近流動(dòng)相截止波長且室溫波動(dòng)大于1℃的情況下,，造成噪音過大的情況，不影響保留時(shí)間,。

② 流動(dòng)相不在截止波長范圍且室溫波動(dòng)大于3℃以上的情況下,，造成流動(dòng)相溫度的變化，進(jìn)而影響保留時(shí)間,、基線漂移,，但不影響基線噪音。

通過檢測器的原理,，我們可以發(fā)現(xiàn)PDA,、RF、RID等檢測器也易受環(huán)境溫度的影響,。

四季更迭,，氣溫波動(dòng)。液相色譜儀使用中應(yīng)關(guān)注溫度變化,，從而消除溫度對分析的影響,。