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N-聚糖唾液酸結(jié)合異構(gòu)體鑒定——SialoCapper™-ID試劑盒+MALDI-8020

閱讀：697 發(fā)布時間：2021-11-30

唾液酸（SA）是酸性單糖的家族名稱,，包括 N-乙酰神經(jīng)氨酸 (NeuAc) 和 N-羥乙酰神經(jīng)氨酸 (NeuGc),，主要存在于聚糖的非還原末端。是一種天然存在的碳水化合物,，最初由頜下腺粘蛋白分離出,，因此而得名。唾液酸通常以低聚糖,，糖脂,，糖蛋白的形式存在。唾液酸可以以 α2,3- 或 α2,6- 鍵類型存在,。這樣的連接異構(gòu)體在生物學(xué)上很重要,，因為不同連鎖類型可能與各種疾病有關(guān)，例如病毒感染和癌癥,。

近年來,，質(zhì)譜技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于分析聚糖,。然而,，鑒定含有多個唾液酸殘基的復(fù)雜聚糖的唾液酸鍵類型仍然具有挑戰(zhàn)性。本研究工作通過使用“SialoCapper-ID 試劑盒”進行*的衍生化,，然后進行 MALDI-8020 MS分析,，從而鑒定2-氨基吡啶（PA）標(biāo)記的聚糖上的酸譜系類型。

SialoCapper-ID 試劑盒是一種用于聚糖預(yù)處理的新型試劑盒,，可簡化唾液酸鍵特異性烷基酰胺化 (SALSA 方法）步驟,。SALSA通過中和殘留物來防止在聚糖預(yù)處理和 MS 分析過程中唾液酸殘留物的損失。此外,，它允許通過以特定鍵的方式衍生殘基來基于 MS 區(qū)分唾液酸鍵異構(gòu)體,。

SALSA法的衍生方案

本實驗中，N-連接聚糖通過肼解作用從51只大鼠102只耳蝸血管紋衍生的糖蛋白中釋放出來的,。N-聚糖的還原端用PA標(biāo)記,。然后根據(jù)唾液酸的數(shù)量通過 DEAE 陰離子交換 HPLC 對 PA 標(biāo)記的聚糖進行分離，并在 ODS 柱上使用反相 (RP) HPLC 進一步分離,。使用酰胺柱和 LC-MS 通過正相 (NP) HPLC 分析分級的 N-聚糖,，并根據(jù)二維 (2-D) HPLC 分析 (RP/NP) 的結(jié)果確定 N-聚糖的結(jié)構(gòu) 和 LC/MS 分析。最后,，使用 SialoCapper-ID Kit 進行唾液酸鍵特異性衍生化,，用于未確定唾液酸鍵類型的分離。

在用碳芯片對 14 份 PA 標(biāo)記的聚糖進行脫鹽后,，使用 SialoCapper-ID 試劑盒在試管中以液相反應(yīng)的形式進行唾液酸鍵特異性衍生化,。

除了通過 2-D HPLC 和 LC/MS 進行結(jié)構(gòu)測定外，研究者另辟蹊徑，使用MALDI-8020+ SialoCapper-ID 試劑盒根據(jù)唾液酸鍵特異性衍生化產(chǎn)生的質(zhì)量變化來區(qū)分唾液酸鍵類型,。相對于LC/MS,，MALDI-MS有利于輕松快速鑒定唾液酸鍵類型，特別是在分析多個樣品時,。