生物藥島津說-利用島津Q-TOF質(zhì)譜進(jìn)行貝伐單抗生物類似藥抗體表征分析
Bevacizumab是重組人源化人血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)單克隆抗體,作為美國第一個(gè)獲得批準(zhǔn)上市的抑制腫瘤血管生成的藥,可用于轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌以及非鱗狀非小細(xì)胞肺癌治療等,。在中國,,超過10家貝伐珠單抗生物類似藥在研發(fā)上市過程中,面對(duì)生物類似藥分析,,充滿技術(shù)挑戰(zhàn),,貝伐單抗生物類似藥表征是質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)之一,分析過程中,,抗體肽圖分析方法尤為關(guān)鍵,,今天我們就聊一聊貝伐單抗生物類似藥肽圖分析技術(shù)方法。
肽圖分析(peptide mapping)是研究抗體藥物結(jié)構(gòu)組成的重要技術(shù)之一,,抗體通過酶切處理后,,利用色譜結(jié)合島津高分辨Q-TOF質(zhì)譜LCMS-9030分析,不僅可以對(duì)蛋白質(zhì)氨基酸序列進(jìn)行分析,,同時(shí)可以對(duì)于相應(yīng)肽段的翻譯化修飾(PTM)進(jìn)行分析,。通過島津反相HPLC方法分離不同性質(zhì)的肽段,后續(xù)肽段通過高分辨質(zhì)譜進(jìn)行一級(jí)和二級(jí)掃描,,通過監(jiān)測(cè)的母離子和子離子匹配相應(yīng)的肽段氨基酸序列以及存在的修飾,。肽圖分析是抗體蛋白藥物質(zhì)量控制的重要手段,島津高分辨質(zhì)譜可以完成相關(guān)所有的分析檢測(cè)項(xiàng)目。
分析儀器及色譜柱方案
01分析儀器
LCMS-9030四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀使高速度,、高靈敏度的四極桿質(zhì)譜與TOF技術(shù)的緊密結(jié)合,。融合島津先進(jìn)工程技藝的DNA,打造出速度與出色性能兼?zhèn)涞娜乱淮叻直尜|(zhì)譜儀,,以優(yōu)異表現(xiàn)輕松勝任定性和定量分析挑戰(zhàn),。
LCMS-9030
02液相色譜柱
● 反相肽段分析用色譜柱
● 壽命長,耐壓高,,出峰穩(wěn)定
Shim-pack GISS-HP,3um,,150*3.0 mm
應(yīng)用實(shí)例
以bevacizumab 生物類似藥為例,進(jìn)行peptide mapping分析,,將抗體蛋白通過胰酶酶切后,,通過反相色譜質(zhì)譜分離后進(jìn)入高分辨Q-TOF質(zhì)譜進(jìn)行一級(jí)全掃描和二級(jí)掃描,高分辨數(shù)據(jù)提取分析匹配相應(yīng)的肽段序列,,完整流程如下圖所示,。
圖. 利用島津LCMS-9030抗體測(cè)序基本流程以及舉例
島津分析bevacizumab 生物類似藥序列分析,通過Shim-pack GISS-HP色譜柱(3um,,150*3.0 mm),,可以高效分離酶切后的輕重鏈肽段,后用LC-MS 9030 進(jìn)行一級(jí)和二級(jí)掃描,,參數(shù)色譜質(zhì)譜參數(shù)如下表所示,。
圖. 利用島津LCMS-9030抗體測(cè)序詳細(xì)參數(shù)
通過軟件分析高分辨數(shù)據(jù),進(jìn)而匹配生物類似藥的重鏈和輕鏈序列,,完成整個(gè)抗體的肽圖分析,。因篇幅有限,以重鏈肽段序列部分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行展示,,匹配覆蓋率100%,,可以說明島津LCMS-9030 Q-TOF質(zhì)譜在抗體肽段分析方面具有強(qiáng)大的實(shí)力。部分序列分析結(jié)果見下圖所示,。
圖.bevacizumab 生物類似藥重鏈測(cè)序結(jié)果展示(部分展示)
結(jié)合前述案例,,島津建立高分辨質(zhì)譜LCMS-9030針對(duì)抗體藥物進(jìn)行肽圖分析完整策略,此外對(duì)于分子量分析,、翻譯化修飾,、二硫鍵分析、糖基化分析,,LCMS-9030可以完成所有相關(guān)抗體藥物關(guān)鍵質(zhì)量屬性檢測(cè),,為用戶節(jié)能增效,創(chuàng)造大價(jià)值,。