細(xì)菌的接種方法有很多種,如劃線法,、涂布法,、傾注法、斜面接種法,、液體培養(yǎng)基接種法,、螺旋接種法等,其方法和應(yīng)用各有不同,,下面進(jìn)行解釋以幫助實驗人員選擇操作,。
劃線法:此法主要用于菌種分純,獲得單菌落
由接種環(huán)沾取少許待分離的材料,,在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線,、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線,微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少,,并逐步分散開來,,如果劃線適宜的話,微生物能一一分散,,經(jīng)培養(yǎng)后,,可在平板表面得到單菌落。
優(yōu)點:可以觀察菌落特征,,對混合菌進(jìn)行分離,。
缺點:不能用于菌落計數(shù)。
涂布法:此法主要用于菌落總數(shù)計數(shù)
先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中,,然后用無菌吸管吸取0.1ml菌液接種在已凝固的瓊脂平板上,。再用無菌L型玻璃棒將菌液在平板上涂抹均勻,將涂抹好的平板平放于桌上20~30min,,使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi),,然后將平板倒轉(zhuǎn),保溫培養(yǎng),至長出菌落后即可計數(shù),。
優(yōu)點:可以計數(shù),,可以觀察菌落特征。
缺點:接種前需梯度稀釋,,吸收量較少,,較麻煩,平板不干燥效果不好,,容易蔓延,。
傾倒法:此法主要用于菌落總數(shù)的計數(shù)
吸取1ml菌液加入平板中,倒入已融化并冷卻至45~50℃的細(xì)菌培養(yǎng)基,,輕輕轉(zhuǎn)動平板,,使菌液與培養(yǎng)基混合均勻,冷疑后倒置,,適溫培養(yǎng),。至長出菌落后即可計數(shù)。
優(yōu)點:可以計數(shù),,較方便,。
缺點:接種前需梯度稀釋,不能觀察菌落特征,,不適用于嚴(yán)格好氧菌和熱敏感菌,。
斜面接種法:此法主要用于保存菌種,或觀察細(xì)菌的某些生化特性和動力
用接種環(huán)或接種針伸入菌種管內(nèi),,挑取用來移種的菌落,。伸入斜面培養(yǎng)管內(nèi),先從斜面底部到頂端拖一條接種線,,再自下而上蜿蜒劃線,,或直接自下而上地蜿蜒劃線。接種完成之后,,用火焰滅菌培養(yǎng)管口,,并塞上棉塞,置于37℃培養(yǎng),。
液體培養(yǎng)基接種法:此法主要用于菌液比濁實驗
用滅菌接種環(huán)挑取菌落或標(biāo)本,,在試管內(nèi)壁與液面交界處輕輕研磨,使細(xì)菌均勻得散落在液體培養(yǎng)基中,。
螺旋接種法:此法主要用于菌落總數(shù)計數(shù)
Spiral plater 可以在無任何全部或中間稀釋的情況下快速細(xì)菌接種,。對數(shù)減少的樣品容量以阿基米德螺旋線的形式被自動分注在旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)基上每一點的容量可以被知曉和校準(zhǔn),。菌液的濃度可以通過培養(yǎng)皿上一定區(qū)域的菌落數(shù)量除以同區(qū)域樣品分注量來計算,。
優(yōu)點:螺旋接種法菌液無需稀釋(其他接種方法均需經(jīng)過梯度稀釋才能計菌落數(shù)),,自動化接種,效率高,,可節(jié)省3/4的耗材和時間
缺點:產(chǎn)品成本高,,適用于樣品量比較大的實驗
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