菌株的保藏方法
1.載體保存法：即將微生物吸附在適當(dāng)載體上進(jìn)行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下幾種,，如
① 土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌種的保藏,。方法是在滅菌的土壤中加入菌液，立即在室溫下進(jìn)行干燥或使菌體繁殖后再干燥,，然后冷藏或在室溫下密封保存,。保存用的土壤原則上以肥沃的耕土為宜，土壤需風(fēng)干,、粉碎,、過篩和滅菌,。
使微生物在土壤中繁殖后進(jìn)行干燥保存的方法是：取適量土壤（5克）置于塞有棉塞的試管中，加水或加入充分稀釋的液體培養(yǎng)基（以含水量為土壤大持水量的60%為宜）,，然后高壓滅菌,。再將需保存的微生物進(jìn)行大量接種，培養(yǎng)至菌絲能用肉眼確認(rèn)的程度為止,，移入干燥器中經(jīng)短時(shí)間干燥或風(fēng)干后密封,，冷藏或室溫保存。
② 砂土保存法：取清潔的砂,，過60目篩去掉大砂粒,，并用磁鐵吸去砂中鐵屑，再用NaOH溶液,、10% HCl溶液和水交替清洗數(shù)次,，干燥后，置于試管或安瓶管中保持2～3cm深,，再經(jīng)干熱滅菌后,，加入1ml菌種培養(yǎng)液，經(jīng)充分混勻后,，放入真空干燥器中,，*干燥后熔封保存。也可用二份洗凈的砂（經(jīng)HCl預(yù)處理）和一份貧瘠,、過篩的黃土攙和后滅菌,，再進(jìn)行菌種保藏,。
③ 硅膠保存法：以6～16目的無色硅膠代替砂子,，干熱滅菌后，加入菌液,。加菌液時(shí),，由于硅膠的吸附熱常使溫度升高，因而需設(shè)法加以冷卻,。
④ 磁珠保存法：將菌液浸入素?zé)胖椋ɑ蚨嗫撞Ａе椋┖笤龠M(jìn)行干燥保存的一種方法,。在螺旋口試管中裝入1/2管高的硅膠（或無水CaSO4），上鋪玻璃棉,，再放上10～20粒磁珠,，經(jīng)干熱滅菌后，接入菌懸液,，后冷藏,、室溫保藏或減壓干燥后密封保藏。本法對酵母菌很有效,，特別適用于根瘤菌,，可保存長達(dá)兩年半時(shí)間,。
⑤ 麩皮保存法：在麩皮內(nèi)加入60%的水，經(jīng)滅菌后接種培養(yǎng),，后干燥保藏,。
⑥ 紙片（濾紙）保存法：將滅菌紙片浸入培養(yǎng)液或菌懸液中，常壓或減壓干燥后,，置于裝有干燥劑的容器內(nèi)進(jìn)行保存,。
2.
冷凍保存法：適用于抗凍力強(qiáng)的微生物。這些微生物可在其菌體細(xì)胞外遭受凍結(jié)的情況下而不受損傷,，而對其它大多數(shù)微生物而言,，無論在細(xì)胞外凍結(jié)還是在細(xì)胞內(nèi)凍結(jié)，都會對菌體造成損傷,，因此當(dāng)采用這種保藏方法時(shí),，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)，
① 要選擇適于冷凍干燥的菌齡細(xì)胞,；
② 要選擇適宜的培養(yǎng)基,，因?yàn)槟承┪⑸飳鋬龅牡挚沽ΓｋS培養(yǎng)基成分的變化而顯示出巨大差異,；
③ 要選擇合適的菌液濃度,，通常菌液濃度越高，生存率越高,，保存期也越長,；
④ 在菌液內(nèi)不添加電解質(zhì)（如食鹽等）；
⑤ 可在菌液內(nèi)添加甘油等保護(hù)劑,，以防止在冷凍過程中出現(xiàn)菌體大量死亡的現(xiàn)象,。同樣，也可添加各種糖類,、去纖維血液和脫脂牛乳等具有良好保護(hù)效果的溶劑,，但對有些微生物而言，不加保護(hù)劑時(shí)更有效,。
⑥ 原則上應(yīng)盡快進(jìn)行冷凍處理,，但當(dāng)加入保護(hù)劑時(shí)，可靜置一段時(shí)間后再進(jìn)行處理,。
⑦ 就動物細(xì)胞而言,，應(yīng)在－20℃范圍內(nèi)以1℃/min左右的速度緩慢降溫，此后必須盡快降到貯藏溫度,；而對絕大多數(shù)微生物而言,，則不必如此，如結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜的原蟲則可在－35℃范圍內(nèi)進(jìn)行緩慢降溫,，而噬菌體則必需采用上述的二階段法進(jìn)行冷凍,；
⑧ 若進(jìn)行長期保存,，則貯藏溫度越低越好；
⑨ 取用冷凍保存的菌種時(shí),，應(yīng)采取速融措施,，即在35～40℃溫水中輕輕振蕩使之迅速融解。而就厭氧菌來說,，則應(yīng)選擇靜置融化的措施,。當(dāng)冷凍菌融化后，應(yīng)盡量避免再次冷凍,，否則菌體的存活率將顯著下降,。
3.傳代保存法：有些微生物當(dāng)遇到冷凍或干燥等處理時(shí)，會很快死亡,，因此在這種情況下,，只能求助于傳代培養(yǎng)保存法。傳代培養(yǎng)就是要定期地進(jìn)行菌種轉(zhuǎn)接,、培養(yǎng)后再保存,，它是基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生產(chǎn)菌種的保存,。
傳代保存時(shí),，培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富,，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低,。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種,，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣,。
一般地，大多數(shù)菌種的保藏溫度以5℃為好,，像厭氧菌,、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進(jìn)行保存,，而蕈類等大型食用菌的菌種則可以室溫直接保存,。
傳代培養(yǎng)保存法雖然簡便，但其缺點(diǎn)也很明顯,，如：①菌種管棉塞經(jīng)常容易發(fā)霉,；②菌株的遺傳性狀容易發(fā)生變異；③反復(fù)傳代時(shí),，菌株的病原性,、形成生理活性物質(zhì)的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期轉(zhuǎn)種,，工作量大,；⑤雜菌的污染機(jī)會較多,。
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