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DNA合成儀的基本組成結(jié)構(gòu)和性能

閱讀:1757      發(fā)布時間:2016-4-19
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  試劑驅(qū)動系統(tǒng)
  
  一般地,DNA 合成儀采用一定壓力的惰性氣體(氬氣)或氮氣及電磁閥組驅(qū)動液體試劑,,也可采用氦氣驅(qū)動試劑,。某些合成儀采用slider block滑塊系統(tǒng)及精密蠕動泵,可不采用氣體為驅(qū)動系統(tǒng),。采用氣體及電磁閥驅(qū)動液體試劑時,,需首先將管路系統(tǒng)電磁閥前段,含試劑瓶組中壓力加壓到規(guī)定氣壓,,通過合成管理軟件或手動打開電磁閥(一般打開時間為數(shù)ms),,即可驅(qū)動液體試劑到所需的合成柱中。
  
  試劑和堿基瓶組
  
  DNA合成儀一般需堿基瓶組及試劑瓶組,。試劑瓶組一般zui少為6個,,含脫保護劑(Deb)、活化劑(act),、蓋帽試劑A(capA),、蓋帽試劑B(capB)、氧化劑(OXI)及洗脫乙腈(ACN),,每種儀器一般都多設(shè)置1-2個試劑瓶位,,用于特殊產(chǎn)物的合成。堿基瓶組一般zui少為4個標(biāo)準(zhǔn)堿基(A/C/G/T),同時搭配2-多個特殊堿基瓶位,,用于熒光標(biāo)記等合成,。
  
  壓力管路及輸送管路
  
  DNA 合成儀的一般原則需要保持內(nèi)外氣體隔絕,因此無論試劑瓶,、堿基瓶均需密封保持一定壓力,。所有壓力管路目前均采用特氟龍導(dǎo)管,直徑為1/16—1/8吋,。
  
  每個瓶子都有一個氬氣壓力管道及輸送管道進入瓶蓋插塞,,對于亞磷酰胺,1—8號瓶其壓力管道也作為排氣管,。氬氣管要保持在液體水平以上,,而輸送管卻伸到瓶的底部。當(dāng)閥門正確設(shè)置打開時,,儲液瓶上部空間由氬氣加壓,,液體被推進輸送管,流到其目的地,。
  
  亞磷酰胺瓶排氣
  
  除了加壓外,,亞磷酰胺瓶都是用壓力排氣管排氣的。把亞磷酰胺放人儀器前,,要用氬氣排除空氣使其凈化,。凈化是通過輸送管輸送氣體,當(dāng)氣體輸送到瓶內(nèi)時,,空氣經(jīng)壓力排氣管排出,。這是由瓶子更換步驟自動完成的。廢液瓶是輸送系統(tǒng)的低壓側(cè),,必須將出口與大氣相通,。要確保排氣管通到通風(fēng)柜。如果排氣管阻塞,,將會產(chǎn)生反壓,,試劑和溶劑的輸送會受到抑制。
  
  輸送電磁閥
  
  試劑輸送系統(tǒng)包括兩個試劑閥塊(8堿基儀器有3個)及2個或4個柱閥塊,。閥塊控制氣體和化學(xué)試劑流人柱子及出口,。除亞磷酰胺和四唑以外,試劑和溶劑都被同時輸送到所有活化柱,。當(dāng)有多個活化柱時,,對流速的細微變化,以自動調(diào)節(jié)每個柱子的輸送次數(shù)來補償,。每一個5—端口柱閥塊將流出物導(dǎo)人廢液口,、DMT收集口,或DNA收集瓶,,它也控制用于除去或沖洗柱內(nèi)和柱閥塊內(nèi)的試劑的氬氣,。
  
  輔助真空
  
  對于閥塊的適當(dāng)運行,關(guān)鍵是隔膜形成一個圓頂小空隙,,每次電磁閥打開時,,抽氣泵為每個閥塊提供了輔助真空,,輔助真空在隔膜的螺線管一側(cè)形成,使隔膜形成一圓頂空隙,。
  
  合成柱
  
  起始結(jié)合在載體(一般為CPG)上的核苷酸是裝在一次性的柱子中,,除柱體外,還有2個固定過濾板和2個接頭,,所有的部件都由惰性材料制成,。固定過濾板是多孑L性聚苯乙烯固定在兩端蓋子中。人口和出口都是母路厄氏(1uer)接頭,,與儀器的公路厄氏接頭配對,。柱子是對稱的(沒有頂端和底部、前后之分),,可以以任何方式與公路厄氏接頭相連接,。每一個柱子都用顏色編號,表示不同的起始核苷酸,,以及有一個*的連續(xù)順序號碼,。正常的流路是從底部進入,通過向上輸送液體,,使CPG顆粒上升并保持懸浮狀態(tài),。溶劑和試劑的流速已經(jīng)設(shè)置好,能使顆粒適當(dāng)?shù)鼗旌稀?/div>
  
  路節(jié)流閥
  
  試劑通過底部的luer接頭,,流到柱子,,如果沒擰上下面的一個luer接頭,應(yīng)會在一個圓柱形的玻璃流路節(jié)流閥上發(fā)現(xiàn),。試劑通過流路節(jié)流閥中一個很小的通道流到柱子,。小量的試劑可以在流路節(jié)流閥中結(jié)晶,長期這樣會造成流路阻塞,。
  
  廢液和排氣
  
  大多數(shù)化學(xué)試劑輸送的zui終點是廢液瓶,,廢液瓶是一個空立著的10L的聚苯乙烯容器,可放在合成儀附近的地板上或放在低于儀器的附近工作臺上,。排氣管將廢氣導(dǎo)人適當(dāng)?shù)呐艢庋b置,,如排煙罩
  
  電導(dǎo)池
  
  電導(dǎo)流動池是為了測定在每個DNA合成循環(huán)內(nèi)釋放的DMT陽離子的總電導(dǎo)而設(shè)計的。流動池是由一空隙隔開的兩個電極組成,,在空隙之間應(yīng)用一小電壓,。DMT陽離子流過電導(dǎo)池時起電導(dǎo)作用。
  
  (十一)電池
  
  DNA合成儀一般帶有鋰電池,,可以使用幾年,。當(dāng)主電源斷開時,所有的合成參數(shù)都被保留下來。這些參數(shù)包括儲存的DNA序列,,用戶設(shè)定的循環(huán),、步驟和功能,以及瓶子使用資料等,。如果正在合成中電源出現(xiàn)故障,,合成將被中斷,,只有主電源恢復(fù)時合成才可重新開始,。電池還保持合成儀內(nèi)部的時鐘計時。
  
  (十二)控制器
  
  控制器指導(dǎo)和初始合成儀的所有活動,,它的主要部分是軟件,、微處理機、顯示屏幕,、鍵板及相關(guān)的電子部件,。軟件控制合成的所有必要操作并由微處理機來解釋和執(zhí)行。軟件儲存在一個可取出的存儲卡中,,這個存儲卡插在儀器的背面,。合成信息顯示在液晶顯示屏上,通過選擇鍵板上的鍵可與儀器交流,。軟件是“菜單驅(qū)動”,,通過按適當(dāng)?shù)逆I,可選擇一項,,給予指令,。為了完成自動合成,軟件應(yīng)用一個包含一系列步驟的循環(huán)來完成全部化學(xué)反應(yīng),。

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