制備型液相色譜通常都被認(rèn)為和大容量色譜柱和高流速有關(guān)聯(lián)的,。然而并不是以設(shè)備的大小和系統(tǒng)消耗的流動相的多少來決定制備液相色譜,，而是依據(jù)分離目的來決定。分析液相的目的是給一種組份進(jìn)行定量和定性,。制備液相的目的是對產(chǎn)品的單體進(jìn)行提取和純化,。與傳統(tǒng)的純化方法（如蒸餾、萃?。┍容^,，制備液相是一種更有效的分離方法，因此被廣泛應(yīng)用在樣品和產(chǎn)品的提取和純化上,。隨著合成,、植化、生化和制藥等領(lǐng)域?qū)Ω呒兌冉M份的需求不斷增加,，制備型液相色譜儀應(yīng)用的領(lǐng)域也在迅速的擴(kuò)大發(fā)展,。
制備型液相色譜的分離目的是從混合物中得到純物質(zhì)。為了縮短分離時(shí)間和提高分離效率,，制備型液相色譜的的進(jìn)樣品量很大,，導(dǎo)致色譜柱的分離負(fù)荷相應(yīng)加大，因此必須加大色譜柱填料,，增大柱內(nèi)徑和柱長,，使用的流動相相對增多。然而,，當(dāng)色譜柱上的樣品負(fù)載加大時(shí),，往往會導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純產(chǎn)品。制備型液相色譜要解決容量與柱效之間的矛盾,，對重現(xiàn)性也要考慮,。從經(jīng)濟(jì)上來說,，要少用填料，少用溶劑,，盡可能多的得到產(chǎn)品,。
一、樣品的前處理：
制備型液相色譜柱分離的樣品多,，比分析型液相色譜柱更容易受污染,，樣品前處理非常必要。
二,、TFA在緩沖液中的作用：
1,、TFA起到類似離子對的作用，一般濃度在0.05%～0.1%,。濃度過高會使溶液偏酸,，長時(shí)間使用可能影響色譜柱壽命,。
2,、TFA可抑制硅膠表面的硅醇基，改善堿性化合物的峰形,。若0.1%TFA分離不好,，可加大濃度到0.2%，但用完后要及時(shí)沖洗色譜柱,。
3,、走梯度時(shí)走成基線漂移，但對制備影響不大,。
三,、降低柱壓的方法：
采用1%乙酸水溶液和甲醇二元梯度。
四,、提高檢測下限的方法：
1,、如果是等度洗脫，一定要改成單元等度,。
2,、盡量采用乙腈－水系統(tǒng)洗脫。乙腈紫外吸收小,，相同條件下噪音小,。
五、用水要求：
不含金屬離子和細(xì)菌,。
六,、分析方法開發(fā)中流動相的調(diào)整原則：
1、由強(qiáng)到弱：
一般先用90%的乙腈或甲醇－水或緩沖溶液進(jìn)行試驗(yàn),，可很快得到分離結(jié)果,，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）的比例,。
2、三倍規(guī)則：
每減少10%的有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）的量,，保留因子增加約3倍,，此為三倍規(guī)則。調(diào)整時(shí)注意觀察各個(gè)峰的分離情況,。
3,、粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：
當(dāng)分離達(dá)到一定程度時(shí)，應(yīng)將有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）10%的改變量調(diào)整為5%,，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率,，直至各組分的分離情況不再改變。
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