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上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品: 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |

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2015-5-11 閱讀(1534)
提 供 商 | 上海申知心生物科技有限公司 | 資料大小 | 12KB |
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資料圖片 | 下載次數(shù) | 227次 | |
資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 1534次 |
實驗材料和試劑
(一)實驗樣品
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
(二)試劑
1.l DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) (天根生物科技有限公司)
2.1mg/ml溴化乙錠溶液 (碧云天)
3.電泳緩沖液(TAE)(碧云天)
40 mmol/L Tris-乙酸
1 mol/L EDTA
4.2.5% 瓊脂糖凝膠
(配制方法:稱取瓊脂糖2.5克,,加入100ml TAE電泳緩沖液)
(三)儀器
微量移液器 天能電泳儀
天能水平電泳槽 天能透射紫外觀察儀
實驗步驟
1.選擇合適的水平式電泳槽,,調(diào)節(jié)電泳槽平面至水平,。檢查穩(wěn)壓電源與正負(fù)極的線路,。
2.選擇孔徑大小合適的點樣梳子,,垂直架在電泳膠模的一端,,使點樣梳子底部離電泳膠模底部的距離為1.0mm,。
3.制備2.5%瓊脂糖凝膠,,100℃水浴加熱至瓊脂糖融化均勻。
4.用吸管取少量瓊脂糖凝膠溶液將電泳膠模四周密封好,,防止?jié)补喹傊悄z板時發(fā)生滲透,。待瓊脂糖凝膠冷卻至60℃左右時,,加入一滴溴化乙錠,搖勻,,輕輕倒入電泳膠模中,,瓊脂糖凝膠的厚度在3~5mm。倒膠時要避免產(chǎn)生氣泡,,若有氣泡可用吸管小心吸去,。
5.瓊脂糖凝膠凝固后,在室溫放置20分鐘,,小心拔掉點樣梳子和電泳膠模兩端的擋板,,保持點樣孔的完好。
6.將電泳膠模放入電泳槽中,,加入電泳緩沖液,,使電泳緩沖液面高出瓊脂糖凝膠表面1~2mm。如點樣孔內(nèi)有氣泡,,用吸管小心吸出,,以免影響加樣。
7.將15ulDNA樣品與1/5體積的溴酚藍(lán)指示劑點樣緩沖液混合,。上樣緩沖液不僅可以提高樣品的密度,,使樣品均勻沉到樣品孔內(nèi),還可以使樣品帶顏色,,便于上樣和估計電泳時間和判斷電泳的位置,。
8.用微量移液器將樣品5ul小心加入加樣孔內(nèi),記錄樣品點樣秩序,。
9.蓋上電泳槽,,開啟電源開關(guān),高電壓不超過5V/cm(100~150V恒壓電泳),,使DNA從負(fù)極向正極移動,。
10. 電泳1小時,電泳完畢后關(guān)閉電源,戴一次性塑料手套取出凝膠,,盡可能將的電泳緩沖液淋干,,在254nm波長的透射紫外燈下觀察,。