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心肌細胞的原代培養(yǎng)

2024-3-5 閱讀(1675)


1. 準備0-1天內(nèi)的SD大鼠新生鼠,。

2. 用溫的無菌去離子水,,輕輕擦拭每只新生鼠,。

3. 70%的乙醇去除新生鼠身體上的污染物,。

4. 斷頭,取心臟,,心臟置于冰的PBSG溶液中,。

5. 除去血液和非心臟組織。

6. 剪碎心臟組織,。

7. 加入胰酶-膠原酶消化液,,每只新生鼠75ul

8. 37°C的搖床培養(yǎng)箱中,,以250 rpm/ 5 min,,消化心肌組織,。

9. 輕輕渦旋,然后離心10秒,,丟棄第一次消化的上清液。

10. 開始第二次消化,,250 rpm/ 5 min,,輕輕渦旋,然后離心10秒,,收集含心肌細胞的上清液到2倍體積的馬血清中,。

11. 重復上述心肌細胞的消化過程,共進行10次消化,,收集心肌細胞懸液,。

12. 使用沒有包被的10cm大皿,預種植心肌細胞1h,。

13. 1h后,,收集沒有貼壁的心肌細胞,200g/10min 離心,,

14. 重懸心肌細胞于DMEM培養(yǎng)基中,,種植在包被過的培養(yǎng)皿中。





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