一,、背景
海馬是大腦顳葉內(nèi)側(cè)的一個解剖結(jié)構(gòu),，因為形狀類似海馬稱為海馬體,。海馬體的主要組成基本單位是神經(jīng)元，海馬神經(jīng)元的生理功能與人的記憶密切相關(guān),。一些疾病會使海馬神經(jīng)元出現(xiàn)損傷,，比如常見的阿爾茲海默病、單純皰疹病毒性腦炎,、自身免疫性腦炎等等,，如果這些疾病出現(xiàn)，就會導(dǎo)致記憶障礙,，甚至癡呆的表現(xiàn),。
神經(jīng)細(xì)胞是近代神經(jīng)學(xué)科中研究重點之一，神經(jīng)細(xì)胞體外培養(yǎng)是指在體外模擬建立體內(nèi)生長條件,，使神經(jīng)細(xì)胞或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在其生存和生長并維持其形態(tài)和功能的方法,。神經(jīng)細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)已成為當(dāng)今神經(jīng)科學(xué)研究中的主要方法之一，與各種先進(jìn)的技術(shù)結(jié)合在一起滲透到各個學(xué)科,，但因神經(jīng)細(xì)胞對體外培養(yǎng)條件要求條件較高難度大而又制約它的發(fā)展,。
二、實驗步驟
1.無菌條件下,，從懷孕18天的SD大鼠腹中取出胎鼠,，放在預(yù)冷的無鈣、鎂的HBSS平衡鹽溶液中,；
2.解剖顯微鏡下,，看清海馬結(jié)構(gòu)，剝?nèi)ズｑR上面的腦膜和血管,；
3.加入0.05%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱內(nèi)消化15分鐘,，每5分鐘搖晃一次；
4.HBSS溶液洗三次,；
5.在HBSS溶液中吹打10次左右,，吹打過程中不能有氣泡；
6.所收集的上清過濾后,，將細(xì)胞懸液于4℃1000rpm離心10min ,，棄上清，管內(nèi)加入種植液1重懸,；
7.臺盼藍(lán)染色計數(shù),，以 3 x 104cells/孔種入包被的24孔板，37℃，5%CO2,，95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。4-6小時后，全量換種植液2,；
8.每周換液兩次,，每次半量換液。
