一,、背景
大腦皮層是調(diào)節(jié)軀體運(yùn)動(dòng)的高級(jí)中樞,。它由初級(jí)感覺(jué)區(qū),、初級(jí)運(yùn)動(dòng)區(qū)和聯(lián)合區(qū)三部分構(gòu)成,。人類(lèi)大腦皮層的神經(jīng)細(xì)胞約有140億個(gè),，面積約2200平方厘米,，主要含有錐體形細(xì)胞、梭形細(xì)胞和星形細(xì)胞（顆粒細(xì)胞）及神經(jīng)纖維,。
體外原代培養(yǎng)神經(jīng)元作為神經(jīng)科學(xué)研究的有力手段,，越來(lái)越受到廣大科研工作者的重視。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細(xì)胞,，動(dòng)物出生后很少分裂,，相對(duì)于其它細(xì)胞而言，神經(jīng)元在體外更難以存活和生長(zhǎng),。因此,，體外培養(yǎng)神經(jīng)元要求的培養(yǎng)方法和營(yíng)養(yǎng)條件均較為特殊。
二,、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 無(wú)菌條件下,，從懷孕18天的SD 大鼠腹中取出胚胎放入預(yù)冷的無(wú)鈣、鎂平衡鹽溶液中,；
2.在解剖顯微鏡下,，分離取出胚胎大腦皮層，除去腦膜,，剪碎組織（1mm3）,，加入0.125%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱內(nèi)消化10 分鐘，期間搖晃一次,；
3.去掉上清,，加入終止液終止消化，吹打10-15次,，不能有氣泡,，收集上清；剩余沉淀加入終止液繼續(xù)吹打5-10次;
4.所收集的上清過(guò)濾后,，將細(xì)胞懸液于4℃1000rpm離心10min ,，棄上清，管內(nèi)加入新鮮培養(yǎng)液重懸,；
5.臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù),，以 3 x 104cells/孔種入包被的24孔板,，37℃，5%CO2,，95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6.每周換液兩次,，每次半量換液
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