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上海申知心生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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2018-11-30 閱讀(2219)
(1)復制方法 健康雄性大鼠,，體重為230～260g,。采用改進的Feeney自由落體硬膜外撞擊方法。損傷裝置由底板,、固定支架,、垂直導桿、下落擊錘和聚乙烯撞擊圓錐組成,。撞擊圓錐頭端直徑為4mm,、高為2.5mm。經(jīng)腹腔注射水合氯醛(按350～400mg/kg體重的劑量)或戊丨巴丨比丨妥丨鈉(按50～60mg/kg體重的劑量)麻醉,。將其頭部固定于立體定向儀上,，剪去頂部毛發(fā)，手術區(qū)域皮膚消毒。沿中線左側(cè)切開頭皮,，分離骨膜,，用牙科鉆于中線旁2mm、緊挨冠狀縫后開一直徑5mm的圓形窗,，硬膜保持完整,。用20g砝碼于10cm和30cm高處通過一金屬導桿墜落，撞擊置于硬膜上的圓錐上致輕,、中型損傷,，另用40g砝碼于25cm高處墜落致重型損傷。輕,、中,、重三型損傷的致傷沖擊力分別為200g·cm、600g·cm和1000g·cm,，用鋅汀粉封閉骨窗,，縫合頭皮，置鼠籠喂養(yǎng),。
(2)檢測指標
1)腦含水量測定 動物斷頭處死后,，30s內(nèi)取出大腦，用濾紙吸盡腦表面血丨漬后,，銳性分離左側(cè)頂葉皮質(zhì)約100mg,，用電子分析天平稱濕重后，置于110℃恒溫干燥箱內(nèi)烤干(24h),，稱干重,。用Elliot公式計算各部位腦含水量百分率：
腦含水量(％)＝[(濕重－干重)/濕重]×比率
2)血腦屏障定量測定 動物于損傷前1h注射2％伊文斯藍(3ml/kg體重)。在取腦組織前,，為清除血液中染料,，可用生理鹽水經(jīng)左心室灌注至右心室流出清亮液體為止。取損傷側(cè)皮質(zhì)分別稱重,，加入二倍體積的二甲基甲酰胺,，50℃水浴中孵育72h，1500g離心,，離心10min,，取上清液。應用分光光度計在伊文斯藍大吸收光譜635mm處檢測吸光度,，從標準曲線上查得伊文斯藍含量,，結果以μg/g腦組織表示。
3)病理學觀察 損傷后24h再次麻醉,，經(jīng)升主動脈快速灌注生理鹽水150ml,，繼之快速灌注冰冷的4％多聚甲醛200ml,，隨后再用其300ml在2h內(nèi)慢速灌注，取腦組織浸入4％多聚甲醛內(nèi)4℃后固定48h,，常規(guī)乙醇脫水,，石蠟包埋，行5μm冠狀切片,，作HE染色及尼氏小體染色,，光鏡下觀察。若采用透射電鏡觀察者,，灌注液為4％多聚甲醛和2％戊二醛/0.1MPB(pH7.4),，隨后浸入2％戊二醛/0.1MPB(pH7.4)內(nèi)，4℃固定過夜,。常規(guī)脫水,，環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片,，醋酸鉛鈾染色,，透射電鏡觀察。
(3)模型特點
1)腦含水量變化 輕型腦損傷傷后30min,，傷側(cè)腦皮質(zhì)含水量開始升高，3h顯著升高,，24h達高峰,，為80％左右。72h含水量有所降低,，至損傷后168h腦含水量恢復正常,。中型腦損傷傷后15min，傷側(cè)皮質(zhì)含水量即已升高,，30min顯著升高,，6h達高峰，也為80％左右,，持續(xù)至24h,。至168h含水量基本恢復正常。重型腦損傷傷后其傷側(cè)皮質(zhì)含水量于傷后15min明顯升高,，傷后3～6h達高峰,，持續(xù)至72h。傷后168h腦含水量仍高于正常對照值,。
2)血腦屏障定量測定 腦損傷后血腦屏障通透性明顯增高,，并隨損傷程度的加重而加重。在損傷15min后,，損傷側(cè)皮質(zhì)伊文斯藍含量就明顯增高,，輕,、中型于6h達高峰，重型者3h達高峰,，24h開始下降,。
3)組織學和超微結構改變
①光鏡觀察 輕型損傷后24h光鏡觀察，見神經(jīng)細胞周圍出現(xiàn)水腫,，尼氏小體染色變淺,，微血管外間隙擴大；中型損傷后24h,，神經(jīng)細胞周圍水腫,，微血管外間隙增大更為明顯；重型損傷后24h,，皮質(zhì)神經(jīng)細胞周圍水腫明顯,，尼氏小體染色明顯變淺，微血管內(nèi)皮細胞腫脹,，管腔狹窄更加明顯,。
②透射電鏡觀察 輕型損傷傷后24h，傷側(cè)皮質(zhì)神經(jīng)細胞線粒體明顯腫脹,，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張,。神經(jīng)細胞周圍神經(jīng)氈腫脹，微血管內(nèi)皮細胞胞飲小泡增多,、腫脹,、管腔狹窄。膠質(zhì)細胞出現(xiàn)水腫改變,，特征同神經(jīng)細胞,，但改變較輕微；中型損傷后24h神經(jīng)細胞線粒體及神經(jīng)氈空泡樣變,，微血管內(nèi)皮細胞腫脹及管腔狹窄明顯,；重型損傷傷后24h，絕大部分神經(jīng)細胞及膠質(zhì)細胞內(nèi)可見到空泡樣變的少數(shù)線粒體及高度擴張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng),。細胞核染色質(zhì)邊聚,，染色變淡，核膜皺縮,。神經(jīng)氈空泡樣變,。微血管內(nèi)皮細胞腫脹更加明顯，胞飲增多,，管腔明顯狹窄,。
(4)比較醫(yī)學 此模型為自由落體腦損傷，屬機械性損傷,，類似臨床上的加速傷,。由于損傷部位局限,，所造成的局部腦損傷性質(zhì)與臨床上見到的腦挫裂傷相似。該模型具有以下優(yōu)點：①損傷機制單一便于定性研究,。②方法簡單,，條件易于控制，采用自由落體打擊法,，可根據(jù)需要控制高度和重量,。③致傷程度較一致，重復性好,。④腦水腫性質(zhì)與臨床上創(chuàng)傷性腦水腫相似,，定量準確。⑤實驗對象采用大鼠,，價廉,、抗病、便于大批定量研究和長時間觀察,。
此方法也可采用小鼠和新西蘭白兔,。小鼠：將小鼠固定在自由落體腦損傷裝置的底部平臺上，用直徑約4mm的撞擊錘頂在小鼠顱骨矢狀面左側(cè)2～4mm處,，取50g砝碼,，從15cm高處自由落下，通過撞擊錘造成閉合性腦外傷模型動物,。兔子：于頭頂部正中矢狀位切開至顱骨表面,，分離兩旁軟組織，微型鉆頭在右頂骨上四點鉆孔,。線鋸鋸開骨橋，在右頂骨上形成直徑為1.5cm×1.5cm的方形骨窗,。置入打擊墊于硬膜外,，用800g·cm的打擊能量使腦組織造成挫裂傷。還納骨瓣,，骨縫用醫(yī)用EC膠封閉,，縫合頭皮。
