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上海申知心生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 高血脂癥動(dòng)物模型,心血管疾病動(dòng)物模型,缺血性心臟病動(dòng)物模型 |
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2018-11-30 閱讀(2140)
(1)復(fù)制方法 健康雄性大鼠，體重為230～260g,。采用改進(jìn)的Feeney自由落體硬膜外撞擊方法,。損傷裝置由底板、固定支架,、垂直導(dǎo)桿,、下落擊錘和聚乙烯撞擊圓錐組成。撞擊圓錐頭端直徑為4mm,、高為2.5mm,。經(jīng)腹腔注射水合氯醛(按350～400mg/kg體重的劑量)或戊丨巴丨比丨妥丨鈉(按50～60mg/kg體重的劑量)麻醉。將其頭部固定于立體定向儀上，剪去頂部毛發(fā),，手術(shù)區(qū)域皮膚消毒,。沿中線左側(cè)切開頭皮，分離骨膜,，用牙科鉆于中線旁2mm,、緊挨冠狀縫后開一直徑5mm的圓形窗，硬膜保持完整,。用20g砝碼于10cm和30cm高處通過(guò)一金屬導(dǎo)桿墜落,，撞擊置于硬膜上的圓錐上致輕、中型損傷,，另用40g砝碼于25cm高處墜落致重型損傷,。輕、中,、重三型損傷的致傷沖擊力分別為200g·cm,、600g·cm和1000g·cm，用鋅汀粉封閉骨窗,，縫合頭皮,，置鼠籠喂養(yǎng)。
(2)檢測(cè)指標(biāo)
1)腦含水量測(cè)定 動(dòng)物斷頭處死后,，30s內(nèi)取出大腦,，用濾紙吸盡腦表面血丨漬后，銳性分離左側(cè)頂葉皮質(zhì)約100mg,，用電子分析天平稱濕重后,，置于110℃恒溫干燥箱內(nèi)烤干(24h)，稱干重,。用Elliot公式計(jì)算各部位腦含水量百分率：
腦含水量(％)＝[(濕重－干重)/濕重]×比率
2)血腦屏障定量測(cè)定 動(dòng)物于損傷前1h注射2％伊文斯藍(lán)(3ml/kg體重),。在取腦組織前，為清除血液中染料,，可用生理鹽水經(jīng)左心室灌注至右心室流出清亮液體為止,。取損傷側(cè)皮質(zhì)分別稱重，加入二倍體積的二甲基甲酰胺,，50℃水浴中孵育72h,，1500g離心，離心10min,，取上清液,。應(yīng)用分光光度計(jì)在伊文斯藍(lán)大吸收光譜635mm處檢測(cè)吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得伊文斯藍(lán)含量,，結(jié)果以μg/g腦組織表示,。
3)病理學(xué)觀察 損傷后24h再次麻醉，經(jīng)升主動(dòng)脈快速灌注生理鹽水150ml,，繼之快速灌注冰冷的4％多聚甲醛200ml,，隨后再用其300ml在2h內(nèi)慢速灌注，取腦組織浸入4％多聚甲醛內(nèi)4℃后固定48h,，常規(guī)乙醇脫水,，石蠟包埋，行5μm冠狀切片,，作HE染色及尼氏小體染色,，光鏡下觀察。若采用透射電鏡觀察者,，灌注液為4％多聚甲醛和2％戊二醛/0.1MPB(pH7.4),，隨后浸入2％戊二醛/0.1MPB(pH7.4)內(nèi)，4℃固定過(guò)夜,。常規(guī)脫水,，環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片,，醋酸鉛鈾染色,，透射電鏡觀察。
(3)模型特點(diǎn)
1)腦含水量變化 輕型腦損傷傷后30min,，傷側(cè)腦皮質(zhì)含水量開始升高,，3h顯著升高，24h達(dá)高峰,，為80％左右,。72h含水量有所降低，至損傷后168h腦含水量恢復(fù)正常,。中型腦損傷傷后15min,，傷側(cè)皮質(zhì)含水量即已升高，30min顯著升高,，6h達(dá)高峰,，也為80％左右，持續(xù)至24h,。至168h含水量基本恢復(fù)正常,。重型腦損傷傷后其傷側(cè)皮質(zhì)含水量于傷后15min明顯升高，傷后3～6h達(dá)高峰,，持續(xù)至72h,。傷后168h腦含水量仍高于正常對(duì)照值。
2)血腦屏障定量測(cè)定 腦損傷后血腦屏障通透性明顯增高,，并隨損傷程度的加重而加重,。在損傷15min后,，損傷側(cè)皮質(zhì)伊文斯藍(lán)含量就明顯增高，輕,、中型于6h達(dá)高峰,，重型者3h達(dá)高峰，24h開始下降,。
3)組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)改變
①光鏡觀察 輕型損傷后24h光鏡觀察,，見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞周圍出現(xiàn)水腫，尼氏小體染色變淺,，微血管外間隙擴(kuò)大,；中型損傷后24h，神經(jīng)細(xì)胞周圍水腫,，微血管外間隙增大更為明顯,；重型損傷后24h，皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞周圍水腫明顯,，尼氏小體染色明顯變淺,，微血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，管腔狹窄更加明顯,。
②透射電鏡觀察 輕型損傷傷后24h,，傷側(cè)皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞線粒體明顯腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張,。神經(jīng)細(xì)胞周圍神經(jīng)氈腫脹,，微血管內(nèi)皮細(xì)胞胞飲小泡增多、腫脹,、管腔狹窄,。膠質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)水腫改變，特征同神經(jīng)細(xì)胞,，但改變較輕微,；中型損傷后24h神經(jīng)細(xì)胞線粒體及神經(jīng)氈空泡樣變，微血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹及管腔狹窄明顯,；重型損傷傷后24h,，絕大部分神經(jīng)細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)到空泡樣變的少數(shù)線粒體及高度擴(kuò)張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細(xì)胞核染色質(zhì)邊聚,，染色變淡,，核膜皺縮。神經(jīng)氈空泡樣變,。微血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹更加明顯,，胞飲增多，管腔明顯狹窄,。
(4)比較醫(yī)學(xué) 此模型為自由落體腦損傷,，屬機(jī)械性損傷,，類似臨床上的加速傷。由于損傷部位局限,，所造成的局部腦損傷性質(zhì)與臨床上見(jiàn)到的腦挫裂傷相似,。該模型具有以下優(yōu)點(diǎn)：①損傷機(jī)制單一便于定性研究。②方法簡(jiǎn)單,，條件易于控制，采用自由落體打擊法,，可根據(jù)需要控制高度和重量,。③致傷程度較一致，重復(fù)性好,。④腦水腫性質(zhì)與臨床上創(chuàng)傷性腦水腫相似,，定量準(zhǔn)確。⑤實(shí)驗(yàn)對(duì)象采用大鼠,，價(jià)廉,、抗病、便于大批定量研究和長(zhǎng)時(shí)間觀察,。
此方法也可采用小鼠和新西蘭白兔,。小鼠：將小鼠固定在自由落體腦損傷裝置的底部平臺(tái)上，用直徑約4mm的撞擊錘頂在小鼠顱骨矢狀面左側(cè)2～4mm處,，取50g砝碼,，從15cm高處自由落下，通過(guò)撞擊錘造成閉合性腦外傷模型動(dòng)物,。兔子：于頭頂部正中矢狀位切開至顱骨表面,，分離兩旁軟組織，微型鉆頭在右頂骨上四點(diǎn)鉆孔,。線鋸鋸開骨橋,，在右頂骨上形成直徑為1.5cm×1.5cm的方形骨窗。置入打擊墊于硬膜外,，用800g·cm的打擊能量使腦組織造成挫裂傷,。還納骨瓣，骨縫用醫(yī)用EC膠封閉,，縫合頭皮,。
