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上海申知心生物科技有限公司
主營產品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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2018-4-4 閱讀(3375)
1.腎大部分切除法
(1)復制方法 體重250g左右成年大鼠,，經腹腔按30mg/kg體重的劑量注射戊巴比妥鈉麻醉，麻醉后大鼠行仰臥固定,，腹部備皮、消毒,，沿左腹旁切口切開皮膚,，暴露左側腎臟，切開上,、下極的包膜,，上下極分別切除腎臟的1/3，用明膠海綿壓迫創(chuàng)面止血,，生理鹽水沖洗,，常規(guī)手術縫合肌層和皮膚，關閉腹腔,。一周后,，大鼠用同樣方法麻醉后仰臥固定，沿右腹旁切口切開皮膚,，暴露右側腎臟,，結扎腎蒂后，切除右腎，常規(guī)手術縫合切口,，關閉腹腔,。造模前后將模型大鼠置于代謝籠收集24h尿液，測定24h蛋白定量,；按實驗預定時間取靜脈血樣測定血肌酐(SCr),、血尿素氮(BUN),；麻醉后放血法處死動物,，取動物殘腎組織標本,，置固定液固定，石蠟包埋,，作常規(guī)組織切片,，HE染色，光鏡下觀察,。
(2)模型特點 術后大鼠傷口無出血和感染,，但體重明顯下降，活動與進食量減少,，體毛疏松,。造模后1周動物可出現(xiàn)蛋白尿，血清尿素氮,、肌酐和24h尿蛋白逐漸升高,；術后6周模型動物進入腎功能代償期，機體出現(xiàn)電解質紊亂,、貧血(RBC,、HGB和HGT降低，耳,、尾蒼白)及血壓顯著升高,；8周時血壓可達到腎血管性高血壓標準；術后10周時模型動物組血清尿素氮,、肌酐,、24h尿蛋白、血壓均顯著升高,，血壓可達到13.7kPa 140mmHg以上,。鏡下病理組織學觀察顯示，腎小球小球毛細血管擴張,，內皮細胞肥大并伴有足突水腫融合,，腎小球出現(xiàn)中到重度系膜增生，局灶節(jié)段性腎小球玻璃樣變性及硬化,，伴小管間質單核淋巴細胞浸潤,。
(3)比較醫(yī)學 腎大部分切除后殘余在腎單位中有血液動力學改變，可引起殘存腎單位的高濾過蛋白尿,，終會損害腎小球引起腎硬化,，導致腎小球硬化為主要特點的 CRF。本模型以腎小球肥大,、硬化為主要特點,，符合腎小球高度濾過致腎衰學說,，模型表現(xiàn)較為接近臨床實際，且具有制備方法簡便易行,，穩(wěn)定性及重復性好,，應用范圍廣等優(yōu)點。但本模型需要作兩期手術,，易引起動物發(fā)生出血等不良反應甚至死亡,，模型制備時間長，手術不易標準化,。目前腎大部分切除CRF模型,，除5/6腎切除模型外，采用3/4,、4/5,、7/8腎切除法均可制備CRF模型。但不同的腎切除模型其發(fā)生腎功能衰竭時間,，血肌酐,、尿素氮、尿蛋白含量變化,，腎組織病理損傷均各有特點,。本模型對臨床上CRF(具有減輕腎組織灌注、高濾過,、抑制系膜細胞增殖,、抗氧化作用)的藥物治療及降壓藥物干預時機的選擇有實用價值。
2.腎動脈分支結扎加切除法
(1)復制方法 體重為200～300g成年大鼠,，經腹腔按30mg/kg體重的劑量注射戊巴比妥鈉麻醉,，麻醉后大鼠行仰臥固定，腹部手術區(qū)常規(guī)消毒,、去毛,，沿左腹旁作切口切開皮膚，進腹后暴露左側腎臟,，在手術顯微鏡下分離腎動脈,，保留左腎數支動脈中的一支，結扎其余的分支,，常規(guī)手術縫合切口,，關閉腹腔。2d后,，用同樣方法麻醉進腹,，4-0絲線結扎右腎腎門區(qū)，切除右腎,，手術關腹,。造模前后將模型大鼠置于代謝籠收集24h尿液,，測定24h蛋白定量,；按實驗預定時間取靜脈血樣測定血肌酐(SCr),、血尿素氮(BIJN)；麻醉后放血法處死動物,，取動物腎組織標本,，置固定液固定，石蠟包埋,，作常規(guī)組織切片,，HE染色，光鏡下觀察,。
(2)模型特點 術后大鼠傷口無出血和感染,，體重明顯下降，活動與進食量減少,，體毛稀疏不齊,。模型大鼠術后血肌酐、血壓明顯升高,，并可出現(xiàn)蛋白尿,，結扎腎出現(xiàn)代償性肥大；鏡下病理組織學觀察可見,，與腎大部切除CRF模型類似的,。腎小球玻璃樣變性及硬化的病理變化。本模型制作方法與腎大部分切除術相似,，結扎后殘余腎臟多為1/6,、1/12、1/16,，即相當于切除5/6,、11/12、15/16腎臟,。
(3)比較醫(yī)學 采用本方法復制的模型,，出血較腎大部切除CRF模型輕，但制備方法需要顯微外科技術,，手術復雜且難掌握,，模型動物死亡率高、術后高血壓顯著,，腎臟病理損傷嚴重,。本模型可制作不同病變程度的CRF模型，與臨床病變表現(xiàn)相似,，適用于藥物治療不同程度CRF時,，藥物劑量和療效的評價,。
3.冷凍加切除法
(1)復制方法 術前測定無蛋白尿，體重為200～300g的成年雄性大鼠,，經腹腔按30mg/kg體重的劑量注射戊巴比妥鈉麻醉,，麻醉后大鼠俯臥固定于手術板上，背部手術區(qū)常規(guī)消毒與去毛,，作背左側切口分離肌層,，暴露左腎，用左手食指從腹部相應部位輕輕向上頂起,，腎臟即滑出皮膚切口外面,，剝離腎筋膜，將預先浸入液氮瓶內的冷刀依次在動物左腎的上,、下極及外側前,、后四個部位冷凍，每處冷凍40s,，然后復位腎臟,，分層縫合手術切口。2周后按同樣方法麻醉,，作二期手術,，結扎腎蒂，切除右腎,。術后6～12周即可制備成穩(wěn)定的CRF模型,。按實驗預定時間分別采血作血液生化測定，并取左腎組織標本,，經固定液固定后,，作常規(guī)組織切片，置光鏡下檢查,。
(2)模型特點 術后動物無傷口感染及出血,，但體重明顯下降，食量及活動量減少,，體毛疏松不齊,。術后2周模型動物血肌酐、血尿素氮即開始升高,，呈進行性發(fā)展,；4～6周血肌酐、血尿素氮可達到高峰,，并維持在高峰數值上下波動,。鏡下病理組織學觀察顯示，腎小球肥大,、玻璃樣變性及硬化,，系膜基質增生肥厚,。
(3)比較醫(yī)學 本模型是針對腎大部切除法建立CRF模型時，對手術操作要求高,、易出血等缺點而設計的,。雖然制作方法較腎大部切除法CRF模型簡單，但腎臟冷凍損傷的程度,，包括冷刀在液氮中的時間,、冷刀在腎表面放置的范圍、接觸面大小均可影響模型病變程度,，而造成差異，造模時應有統(tǒng)一標準,。本模型可通過控制冷凍時間來制備不同病變程度的CRF,，且術中無出血危險，但制作時需要特殊設備,，同時仍不能排除原位壞死組織誘導的免疫機制參與,。本模型適用于臨床上對CRF藥物治療及篩選方面的研究。
4.電凝加切除法
(1)復制方法 體重為25g左右的成年小鼠,，經腹腔按30mg/kg體重的劑量注射戊巴比妥鈉注射麻醉,，麻醉后小鼠俯臥固定于手術板上，背腹部手術區(qū)常規(guī)消毒與去毛,，作背右側切口,，暴露右腎，剝離其周圍脂肪組織及腎包膜,；用針形電燒灼器電凝除腎門周圍2mm組織外的整個右腎表面,，深度約1mm；將燒灼后的腎臟放回腹腔,，常規(guī)手術縫合肌層與皮膚,，手術過程控制在10min左右。然后于12～15d后行第2次手術,，依同樣方法麻醉,，進腹后用絲線結扎左腎腎門，切除左腎,，手術關閉腹腔,。模型成模過程約需18周。按實驗預定時間分別采血作血液生化測定,，并取腎臟組織標本,，經固定液固定后，作常規(guī)組織切片,，置光鏡下檢查,。
(2)模型特點 造模手術后如模型動物傷口無出血,、裂開和感染，一般可在1周內自行愈合,。電灼后1周內模型動物體重明顯下降,，進食與活動減少，體毛疏松,，觀察期間體重增長減緩,。造模后第2周可出現(xiàn)貧血，血尿素氮,、血肌酐升高,，血尿素氮測定值高可為造模前的4倍；尿量及尿蛋白含量增加,，模型動物可出現(xiàn)甲狀旁腺功能亢進如高血壓,、低血鈣、堿性磷酸酶升高等臨床表現(xiàn),。肉眼觀察電凝腎表面蒼白,，腫脹變形；鏡下病理學觀察顯示,，18周時模型動物腎組織內大部分腎皮質壞死,、萎縮，腎小球,、腎小管組織結構破壞消失,，腎間質纖維化。
(3)比較醫(yī)學 采用電燒灼方法可導致模型動物腎臟的腎皮質壞死,，造成大部分腎小球,、腎小管組織結構破壞，引發(fā)殘余腎單位的功能代償性增強,，終形成以腎小球硬化,，腎間質組織纖維化為主要特點的CRF。本模型制作方法簡便,，可一次大批量制作,；模型特征穩(wěn)定可靠，可達中,、重度 CRF程度,，模型成功率高；且手術方法不易出血,、感染,，并且有類似于人類慢性腎衰的客觀指標。采用本方法可制備出同樣的大鼠CRF模型，且能獲得較小鼠更多的采血量用于指標檢測,。本模型適用于臨床上CRF藥物治療,、篩選及評價方面的研究。
